Minimální reziduální choroba karcinomu prsu

Nikola KROČILOVÁ

Bakalářská práce

Minimal residual disease in breast cancer

Anotace:

V České republice je karcinom prsu nejčastějším typem nádorového onemocnění u žen. Vznik metastáz je pro pacientky většinou fatální a k výskytu dochází obvykle u pacientek v remisi. Z tohoto důvodu je včasná a dostatečně citlivá detekce nových zhoubných ložisek velmi důležitá. Jedním z potenciálních diagnostických nástrojů se v posledních letech stává vyšetření přítomnosti minimální reziduální choroby (minimal residual disease, MRD) založené na detekci cirkulujících nádorových buněk (circulating tumour cells, CTCs) v těle pacientky po vyjmutí primárního nádoru, která je bez zjevných příznaků nemoci. Tyto CTCs, které jsou považovány za prekurzory mikrometastáz, lze detekovat celou řadou metod, z nichž jednou z nejcitlivějších a nejvyužívanějších je kvantitativní reverzně transkriptázová polymerázová řetězová reakce (real-time RT-PCR). V předložené studii byly jako markery vhodné pro detekci MRD u karcinomu prsu metodou real-time RT-PCR testovány karcinoembryonální antigen (carcinoembryonic antigen, CEA) a mammaglobin (MAM). Ve vzorcích sentinelových uzlin byla kvantifikována exprese markerů a na základě experimentálně stanovených cut-off hodnot byla určena pozitivita či negativita uzliny na přítomnost CTCs. Prokázali jsme vhodnost markerů CEA a MAM pro vyšetření přítomnosti CTCs ve vzorcích sentinelových uzlin u pacientek s karcinomem prsu. Dále byla provedena analýza přežití bez relapsu (relapse free survival, RFS) a vyhodnocen její vztah k přítomnosti CTCs. Pacientky s přítomností CTCs v sentinelové uzlině vykazovaly kratší přežití než pacientky s negativními uzlinami. Pokud byly ze souboru vyloučeny pacientky s obecně horší prognózou (tj. pacientky s tumorem vyššího stádia, s postižením uzlin, s metastázami, s negativními estrogenovými a progesteronovými receptory a s pozitivní amplifikací HER2) tento vztah se již neprokázal. V rámci studie byla připravena diluční řada standardů pro glyceraldehyd 3-fosfát dehydrogenázu (GAPDH). Tento gen se řadí mezi referenční neboli "housekeepingové" geny a ve studii byl použit k ověření správného průběhu izolace RNA a reverzní transkripce.

Abstract:

Breast cancer is the most frequent type of cancer in women in Czech republic. Formation of metastases is usualy fatal for the patients and usually occurs in patients in remission. For this reason the early and sufficiently senstitive detection of the new malignant bearings is very important. One of the potential diagnostic tools in recent years is becoming an examination of presence of minimal residual disease (MRD) based on detection of circulating tumor cells (CTCs) in the body of patient after removal of the primary tumor, which is without obvious symptoms of the disease. These CTCs, which are considered to be precursors of micrometastases can be detected by a variety of methods, one of the most sensitive and used is a quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction (real time RT-PCR). In the propounded study carcinoembryonic antigen (CEA) and mammaglobin (MAM) were tested as markers suitable for MRD detection in breast cancer by real-time RT-PCR method. Expression of the markers was quantified in the samples of sentinel nodes and based on experimentally determined cut-off values, were determined according to positivity or negativity of nodes for the presence of CTCs. We have proved the suitability of CEA and MAM markers to investigate the presence of CTCs in samples of sentinel nodes in patients with breast cancer. Furthermore, the analysis of relapse free survival (RFS) was also performed and it was evaluated it's relationship with presence of CTCs. Patients with the presence of CTCs in the sentinel node demonstrated a shorter survival than patients with negative nodes. When patients with a generally worse prognosis (patients with higher tumor stage, with afflicted nodes, with metastases, with negative estrogen and progesterone receptor and with positive HER2 amplification) were excluded from the set of patients, this relationship hasn't been proved again. Within the study the preparation of a dilution series of standards for glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) was also performed. This gene belongs to reference or "housekeeping" genes and it was used to verify the correct operation of RNA isolation and reverse transcription in the study.

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 15. 5. 2014

Zveřejnit od: 15. 5. 2014

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Mgr. Andrea Benedíková

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biologie / Molekulární a buněčná biologie