Analýza buněk chronické lymfocytární leukémie a optimalizace ovlivnění jejich genové exprese

Bc. Lucie Poppová

Master's thesis

Analysis of chronic lymphocytic leukemia cells and optimization of gene expression manipulation

Anotácia:

Chronická lymfocytární leukemie je onemocnění s velmi variabilním průběhem. Významným negativním prognostickým faktorem je přítomnost delece/mutace genu pro p53 (TP53). V rámci této práce byla u pacientů, u nichž se vyvinula mutace p53 v průběhu onemocnění, analyzována změna exprese miRNA-34a, miRNA-29c a CELSR1, u kterých byla již dříve zjištěna souvislost s mutačním stavem TP53. Dále byla analyzována bazální exprese genů p21 (CDKN1A) a PUMA (BBC3), dvou známých transkripčních cílů p53, i samotného TP53. Ve druhé části práce byla metodou nukleofekce modifikována exprese v CLL lymfocytech tak, že byla snížena hladina miRNA-29c a v důsledku toho zvýšena exprese MCL-1, známého antiapoptotického proteinu a byl tak napodoben stav/proces, ke kterému dochází in vivo, zejména v pozdějších stádiích nemoci. Na závěr byla ještě optimalizována kokultivace lymfocytů s linií stromálních buněk HS-5 pro zvýšení efektu nukleofekce.

Abstract:

Chronic lymphocytic leukemia is a disease with very variable course. Deletion or mutation of TP53 gene is one of the most significant negative prognostic factors. In this study, expression level of miRNA-34a, miRNA-29c and CELSR1 has been analysed in patients who developed TP53 mutation during the disease course. They are known for their correlation with the mutational state of TP53. Besides these it has been also analysed basal expression of genes p21 (CDKN1A) and PUMA (BBC3), two well-known p53-transcription targets. Also the level of TP53 transcription has been quantified. For the second part of this study, method of nucleofection has been aplicated to decreasse expression of miR-29c in CLL lymphocytes. In respond to this, the level of antiapoptotic protein MCL-1 has been upregulated thus the situation of lymphocyte in vivo transforming process has been simulated optimalization of cocultivation of nucleofected lymphocytes with HS-5 stroma cell line has been also implicated.

Kľúčové slová

CLL, mutace TP53, miR-34a, miR-29c, MCL-1, nukleofekce, qRT-PCR, TP53 mutation, nucleofection

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 15. 5. 2012

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 13. 6. 2012
• Vedúci: Mgr. Šárka Pavlová, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Master programme / odbor:
Biology / Molecular Biology and Genetics