Stanovení protilátek proti parotitidě a interpretace výsledků

Kateřina NUSKOVÁ

Bakalářská práce

Parotitis virus antibodies tetsing and the interpretation of the results

Anotace:

Bakalářská práce je zaměřena na sérologickou diagnostiku epidemické parotitidy (příušnic) a interpretaci výsledků. Data byla získána v laboratoři virologie Nemocnice České Budějovice a.s. v období od ledna 2011 do prosince 2012. Práce je rozdělena do dvou částí, teoretické a výzkumné. Teoretická část zahrnuje historii onemocnění a viru. Jako první popsal příušnice Hippokrates v 5st. př. n. l. jako infekční onemocnění s otoky v blízkosti ucha a u mužů s bolestivostí a zvětšením varlat. Virus první kultivoval Habel (1945) na kuřecím embryu. Virus příušnic má velikost 150 - 200 nm, ale může dosahovat až 340 nm. Patří mezi obalené viry. Řadí se do čeledi Paramyxoviridae, podčeledi Paramyxovirinae a rodu Rubulavirus. Jediným přirozeným hostitelem je člověk. Virus parotitidy se dá prokázat nejen ze slin, ale i z mateřského mléka, krve a různých tkání. Přenáší se kapénkovou cestou, ale i kontaminovanými předměty (např. v dětských kolektivech hračkami). Od 1.4.1987 bylo v tehdejší ČSSR zavedeno povinné očkování proti příušnicím, čímž se výrazně snížil počet onemocnění. Laboratorní virologická diagnostika zahrnuje přímý a nepřímý průkaz. Mezi metody přímého průkazu patří kultivační metody jakými jsou izolace viru na tkáňových kulturách (dříve izolace viru na kuřecích embryích) a průkaz virové RNA metodou RT-PCR. Nepřímým průkazem je sérologické stanovení protilátek v současné době hlavně metodami ELISA, nepřímá imunofluorescence a nedávno vyvinutá technologie multiplex pro stanovení protilátek proti více agens současně. Výzkumnou částí bakalářské práce bylo stanovení parotitid metodou enzymem značené imunosorbentní analýzy (ELISA) pro IgG protilátky a metodou capture ELISA pro IgM protilátky. Obě metody využívají vazbu protilátek na známý antigen viru parotitidy. Cílem výzkumné části bakalářské práce bylo zhodnocení výsledků stanovení protilátek proti parotitidě ve vzorcích od pacientů z Jihočeského kraje vyšetřených v laboratoři virologie Nemocnice České Budějovice a.s. v období od ledna 2011 do prosince 2012 a posoudit četnost výskytu v tomto regionu. Byly stanoveny 3 hypotézy. První hypotéza předpokládala zvýšený výskyt onemocnění parotitidy v dětském věku. Podle výsledných hodnot byl výskyt u dětí prokázán, ale zvýšený výskyt byl zaznamenán u dospívajících a dospělých jedinců. Tato hypotéza nebyla potvrzena. Druhá hypotéza předpokládala, že někteří pacienti budou vyšetřeni opakovaně, vzhledem k náročnější laboratorní diagnostice u očkované populace. Tato hypotéza byla na základě výsledných hodnot z více odběrů potvrzena. Jelikož u většiny očkovaných pacientů byly prokázány z prvního odběru pouze protilátky IgG, byl doporučen druhý odběr za 1-2 týdny, ve kterém byly prokázány protilátky IgM. Třetí hypotéza předpokládala séronegativní výsledky u očkované populace, která bude pravděpodobně neimunní vůči parotitis epidemica. Tato hypotéza byla potvrzena u 14,8 % mužské populace a 14,7 % ženské populace. Výsledkem výzkumu bylo zjištění, že nejvyšší výskyt pozitivních nálezů byl u očkované populace, a to u žen ve věku 20-25 let a u mužů ve věku 16-20 let. Zajímavé byly výsledky u nevakcinované populace, kde nejvyšší procento nemocných bylo jak u mužů, tak u žen ve věku 26-30 let. Výsledky výzkumu mohou být použity pro virologickou laboratorní praxi, pro odborné publikace a pro potřeby vzdělávání.

Abstract:

The article covers diagnostics of Mumps (Epidemic Parotitis) based on the antibody testing and the interpretation of the resuslts. Data were collected from January 2011 to December 2012 in laboratory of virology, Hospital České Budějovice. The article is divided into a two parts, theory and investigation. Theoretical part covers the history of the virus. Mumps were first described by Hippocrates in 5th century BC as infectious disease with swelling of the salivary glands near the ears and in adult males painfull swelling of the testes was described. The Virus was first cultured on a chick embryo by Habel (1945). The size of virion shows considerable variation. Usualy the diameter is 150-200 nm, but occasionally bigger virions (up to 340 nm in dimeter) are observed. The virus is enveloped. Mumps virus is taxonomically located in the family Paramyxoviridae, genus Rubullavirus. Human is the only natural host of Mumps virus. Virus can be found mainly in saliva, but occurs in maternal milk, blood and multiple organs. The virus is transmitted mainly by droplets, but transmission by contaminated toys or other items was observed. The vaccination against Mums was introduced in former Czechoslovakia on 1st April 1987. The vaccination significantly reduced the number of cases of the disease. Diagnosis in the laboratory may use direct or indirect detection. The direct detection may use culture on the appropriate cell line or detection of viral RNA by RT-PCR. Different serological tests have been used to demonstrate specific antibodies. At present, the ELISA methods are the most used. Recently developed multiplex method for detection of the antibodies to several agens in one test may be used. The experimental part of bachelors thesis involved testing of patient´s sera by the method of Enzyme Linkes Immune Sorbent Analysis (ELISA) with parotitis antigen. For detection of IgG, simple sanwich ELISA was used, for the detection of IgM capture ELISA was used.. The goal of experimental part was to evaluate the results of the testing of the Mumps antibodies in patient's samples in Hospital České Budejovice and to assess the frquency of the disease in our region. The investigation covered the period from January 2011 to December 2012. Three hypothesis were set. The first hypothesis presumed that most of the Mumps cases will occur in childhood. In our result, some cases in childhood were proved, but the maximum of the case was proved in young adults. In the second hypothesis was presumed that because of the previous vaccination, the diagnosis will be more complicated and repeated testing will be necessary. This hypothesis was proved. In most of vaccinated patients with clinical Mumps, in first sample only IgG was proved and IgM occured in second (paired) sample after 1-2 weeks. The third hypothesis presumed, that there will be some amount of seronegative patients probably without immunity to Mumps. This was proved in 14,8 % of male and 14,7 % of female vaccinated population. Our results showed, that highest incidence of Mumps was in vaccinated population. In females in age 20-25 years, in males in 16-20 years. The results of the investigation can be used for laboratory practice, publication or for education.

Klíčová slova

Parotitis epidemica, protilátky IgG, protilátky IgM, metoda ELISA

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 14. 8. 2013

Zveřejnit od: 14. 8. 2013

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: MUDr. Dana Teislerová

JIHOČESKÁ UNIVERZITA V ČESKÝCH BUDĚJOVICÍCH

Zdravotně sociální fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Specializace ve zdravotnictví / Zdravotní laborant