Vliv teploty a času na excystaci Cryptosporidium muris izolát CAT21

Bc. Hana DUDÁKOVÁ

Master's thesis

Abstract:

Hlavním cílem této diplomové práce bylo zjistit, zda má tělesná teplota hostitele, pH prostředí a doba expozice vliv na excystaci oocyst Cryptosporidium muris. Pro experiment byl použit izolát CAT21 získaný z přirozeně infikované kočky domácí (Felis catus f. domestica), ovšem primárním hostitelem Cryptosporidium muris jsou hlodavci. Izolát byl dlouhodobě udržován v imunodeficientních SCID myších, ze kterých byl průběžně odebírán trus, aby mohly být provedeny jednotlivé experimenty. Prvním zkoumaným faktorem ovlivňujícím excystaci oocyst byla tělesná teplota hostitele. Oocysty skladované v dH2O byly vkládané do vodní lázně vytemperované na teplotu v rozmezí 21 až 44 °C po dobu 5, 15 a 30 minut. Dle výsledků je optimální teplota pro excystaci oocyst C. muris CAT21 37 °C při době působení 30 minut, při které excystuje až 92 % oocyst. Do práce bylo zahrnuto navíc i zkoumání vlivu pH prostředí na excystaci, kdy byly oocysty vystavené působení roztoků PBS o různé hodnotě pH (2,00 -9,00) a zahřáté ve vodní lázni na 37 °C. Optimální pH prostředí pro excystaci je pH 6,00, při kterém excystovalo až 93 % oocyst. Životaschopnost používaných oocyst byla stanovena barvením pomocí propidium jodidu před každým měřením.

Abstract:

The main aim of this master's thesis was to investigate the impact of environmental pH and the host's body temperature on the excystation of Cryptosporidium muris oocysts. The experiment utilized the CAT21 isolate obtained from a naturally infected domestic cat (Felis catus f. domestica), although rodents are the primary hosts of Cryptosporidium muris. The isolate was continuously maintained in immunodefi-cient SCID mice, from which fecal samples were regularly collected for individual experiments. The first factor examined for its influence on oocyst excystation was the host's body temperature. Oocysts stored in dH2O were subjected to water baths set to temperatures ranging from 21 to 44°C for durations of 5, 15 and 30 minutes. According to the results, the optimal temperature for excystation of C. muris CAT21 oocysts was 37°C for a duration of 30 minutes, resulting in up to 92% excystation. Additionally, the study included an examination of the pH impact on excystation. Oocysts were exposed to PBS solutions with varying pH values (ranging from 2.00 to 9.00) and heated in a water bath at 37°C. The optimal pH for excystation was found to be 6.00, with up to 93% excystation observed. The viability of the oocysts used was determined by staining with propidium iodide before each measurement.

Keywords

Cryptosporidium muris, excystace, hlodavci, kryptosporidióza, pH

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 21. 4. 2024

Thesis defence

• Supervisor: prof. Ing. Martin Kváč, Ph.D.

UNIVERSITY OF SOUTH BOHEMIA IN ČESKÉ BUDĚJOVICE

Faculty of Agriculture and Technology

Master programme / field:
Agricultural Biotechnology / Agricultural Biotechnology