Místně cílená mutageneze rekombinantního proteinu FerB

Bc. Tomáš Kastl

Master's thesis

Site directed mutagenesis of the recombinant protein FerB

Abstract:

In this thesis I focus on the characterization of flavoenzyme FerB. FerB was discovered in the gram-negative soil bacterium Paracoccus denitrificans; it catalyzes the reduction of FeIII, CrVI and coenzyme Q in the cell, employing NADH as an electron donor. All these reactions are two-substrate and they follow the ping-pong kinetic mechanism. For a research purpose the mutants were created bya site-directed mutagenesis. Enzyme activities were measured spectrophotometrically. From the obtained concentration dependencies ofinitial velocities the Michaelis constant as well as the maximal rate of the enzyme-mediated reaction were calculated.

Abstract:

V této diplomové práci se věnuji charakterizaci flavoenzymu FerB. FerB byl objevený v gram-negativní půdní bakterii Paracoccus denitrificans a katalyzuje redukci iontů FeIII, CrVI a koenzymu Q využívající NADH jako donor elektronů. Všechny tyto reakce jsou dvousubstrátové a řídí se ping-pongovým mechanizmem. Pro účely výzkumu byly metodami místně cílené mutagenezi vytvořeny mutanty, jejichž enzymové aktivity byly stanoveny z naměřených hodnot absorbancí s využitím VIS-spektrofotometrie. Ze získaných koncentračních závislostí počáteční rychlosti byly vypočítané Michaelisovy konstanty, stejně tak byla stanovena maximální rychlost enzymem zprostředkované reakce.

Keywords

Železo-reduktáza, chinón-reduktáza, flavín-reduktáza, FMN, rFerBp

Language used: Slovak

Date on which the thesis was submitted / produced: 16. 5. 2013

Thesis defence

• Date of defence: 6. 6. 2013
• Supervisor: prof. RNDr. Igor Kučera, DrSc.

Masaryk University

Faculty of Science

Master programme / field:
Biochemistry / Biochemistry