Koncové značení lineární DNA pomocí TdT a její purifikace pomocí magnetických kuliček

Jana FILIPOVÁ

Bakalářská práce

Linear DNA end labeling using TdT and its purification using magnetic beads

Anotace:

Apoptóza, neboli programovaná buněčná smrt, je důležitým procesem v každém organismu. V dnešní době je hojně studovaná, neboť poruchy regulace apoptózy vedou k nejrůznějším onemocněním. Apoptóza se využívá v testování cytostatik, protože většina cytostatik působí na rakovinné buňky vyvoláním apoptózy. Příkladem metody k detekci apoptózy je TUNEL assay, ve které enzym terminální deoxynukleotidyltransferáza (TdT) označuje volné 3?OH konce vznikající během fragmentace DNA. V této práci jsou popsány nejpoužívanější metody k detekci apoptózy, praktická část je věnována značení lineární DNA pomocí TdT a následné purifikaci pomocí magnetických kuliček. Lineární DNA byla získána štěpením plazmidu pBluescriptII SK(-) restrikční endonukleázou SacI. Purifikace značené DNA proběhla pomocí magnetických kuliček Dynabeads? oligo (dT)25.

Abstract:

Apoptosis is programme cell death and it?s important proces in each organism. Nowadays there are many studies of apotosis, because its malfunction may lead to various disease. Apoptosis is used for cytostatics testing, because most of cytostatics cause apoptosis of cancer cells. An example of method for apoptosis detection is TUNEL assay. In such method enzyme called Terminal deoxynucleotidyl transferase label 3?OH ends which are created during DNA fragmentation. This thesis describe most used methods for apoptosis detection, practical part is focused on linear DNA end labeling using TdT and its purification using magnetic beads. The Linear DNA were generated by plazmid pBluescriptII SK(-) cleavage using restriction endonuclease SacI. The purificataion of labeled DNA was done by magnetic beads Dynabeads? oligo (dT)25.

Klíčová slova

apoptóza, detekce, TUNEL, magnetické kuličky

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 22. 4. 2013

Zveřejnit od: 22. 4. 2013

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 21. 5. 2013
• Vedoucí: Mgr. Jiří Červeň

OSTRAVSKÁ UNIVERZITA V OSTRAVĚ

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biologie / Experimentální biologie