Validace metody pro stanovení aminokyselin v půdách

Bc. Veronika HÁJKOVÁ

Master's thesis

Validation of a method for the determination of amino acids in soils

Abstract:

Cílem této práce je navrhnout extrakční postup aminokyselin z půd a tyto extrakty analyzovat metodou LC-MS/MS. Součástí práce je i validace metody a určení základ-ních validačních parametrů. Konkrétně bylo extrakci a analýze podrobeno pět druhů vzorků půd s různým obsa-hem aminokyselin. Některé půdy byly zatíženy abiotickým stresem v podobě obsahu C10-C40, na který rostliny v dané půdě reagovaly. Provedeným výzkumem bylo zjištěno, že nejlepším extrakčním činidlem je 0,5 M CH3COONH4, na rozdíl od běžně používané deionizované vody. Byly provedeny ana-lýzy pomocí dvou typů chromatografických kolon - HILIC a C18. V případě kolony C18 byla provedena derivatizace vzorků pro stanovení aminokyselin. Derivatizace a analýza na koloně C18 se z hlediska signálu na LC-MS/MS jeví jako účinnější než na HILIC, přičemž kyselina asparagová, histidin, cystin ani lysin nebyly na HILIC sta-noveny. Na koloně C18 se nepodařilo stanovit pouze kyselinu glutamovou. Ostatní zá-kladní aminokyseliny byly úspěšně stanoveny. Koncentrace prolinu i dalších stresových aminokyselin byly značně zvýšené v půdě rostlin s kontaminací.

Abstract:

This thesis aims to offer an extraction method of amino acids from soils and analyze these extracts with LC-MS/MS method. The work includes method validation and de-termination of basic validation parameters. Namely, five kinds of soil items with various content of amino acids were put to ex-traction and analysis. Some soils were saddled with abiotic stress in the form of content C10-C40 which plants in particular soil reacted to. The realized search found that the best extraction chemical reagent is 0.5 M CH3COONH4 as opposed to the commonly used deionized water. There were made analyses with the help of two types of chromatographic columns - HILIC and C18. In the case of the C18 column, there was realized derivatization of samples for the de-termination of amino acids. Derivatization and analysis on the C18 column prove from the point of view of signal on LC-MS/MS more effective than on HILIC, at the same time neither asparagusic acid, histidine, cystine nor lysine were determined. Only glu-tamic acid was not determined on the C18 column. Other biogenic amino acids were successfully identified. Concentrations of proline and other stress amino acids were considerably increased in the soil of plants with contamination.

Keywords

aminokyseliny, extrakce aminokyselin z půdy, validace LC-MS/MS

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 26. 4. 2023

Accessible from:: 31. 12. 2999

Thesis defence

• Supervisor: Ing. Sylvie Kříženecká, Ph.D.

JAN EVANGELISTA PURKYNĚ UNIVERSITY IN ÚSTÍ NAD LABEM

Faculty of Science

Master programme / field:
Analytical Environmental Chemistry and Toxicology / Analytical Environmental Chemistry and Toxicology