Příprava transgenních rostlin Secale cereale se samčí sterilitou

Bc. Aneta WANDROLOVÁ

Master's thesis

Preparation of transgenic plants Secale cereale with male sterility

Anotácia:

Cílem diplomové práce bylo připravit transgenní rostliny žita se samčí sterilitou. Standardně vyšlechtěné sterilní rostliny žita jsou používané pro produkci heterózního osiva a také jednou z podmínek pro produkci námele. Nezralé embrya žita byla transformována biolistickou metodou. Pro transformaci byly použity dva plasmidy pAHC25: PE1-barnase-nos a pAHC25: TA27-barnase-nos. Oba obsahovaly gen pro barnasu pod tapetově specifickým promotorem (PE1 ? rýže, TA27 ? tabák) a gen selekce na herbicid fosfinotricin. Běhen několika stovek transformací finálně zregenerovalo více než dvě stě rostlin žita a přes deset rostlin ječmene. Po analýze regenerovaných rostlin molekulárně biologickými metodami bylo zjištěno, že získané rostliny nebyly transgenní. Nicméně, byla zavedena metoda transformace a optimalizovány podmínky regenerace rostlin z embryonálních kalusů. Negativní výsledek experimentů ukázal, že k dosažení vytyčeného cíle bude třeba zvolit jinou metodu transformace či jiný plasmid s aditivní selekcí na antibiotikum.

Abstract:

The aim of the present study was to prepare transgenic rye plants with male sterility. Classically bred sterile rye hybrids are used for production of heterosis seeds and as a major component for field production of ergot. Immature embryos of rye were transformed by biolistic method using gene gun. Two plasmids pAHC25: PE1-barnase-nos and pAHC25: TA27-barnase-nos were used for transformation. Both plasmids contain gene for barnase under the control of tapetum specific promotors (PE1 from rice, TA27 from tobacco) and phosphinotricin resistance gene. After hundreds of transformation events, approximately two hundreds of rye plants and more than ten barley plants regenerated. Analysis of these regenerants by molecular biology methods revealed that obtained plants were not transgenic. Nevertheless, new method for transformation was introduced to the laboratory and conditions for in vitro rye plants regeneration from embryonic calli were optimized. Negative result of experiments indicates that other method of transformation with additive selection against antibiotics has to be used to achieve planned aim.

Kľúčové slová

Biolistika, Secale cereale L., barnasa, samčí sterilita, tapetum

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 2. 5. 2013

Zverejniť od: 2. 5. 2013

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 27. 5. 2013
• Vedúci: Doc. Mgr. Petr Galuszka, Ph.D.

PALACKÝ UNIVERSITY IN OLOMOUC

Faculty of Science

Master programme / odbor:
Biochemistry / Biochemistry