Význam signální dráhy insulinu ve fyziologii klíštěte Ixodes ricinus

Bc. Tereza KOZELKOVÁ

Master's thesis

Abstract:

In this thesis, the function of the insulin receptor signaling pathway (ISP) in hard ticks Ixodes ricinus was analyzed. Ticks are obligatory blood-feeding (hematophagous) ectoparasites, capable of transmitting a wide variety of pathogens comprising bacteria, viruses, and protozoa that affect animals and humans. The parasite is strictly bonded with its host through a unidirectional transfer of nutrition for its survival, development, and reproduction. The ISP is a highly conserved system, which regulates a variety of physiological and anabolic processes in response to the available nutrition. The aim of the thesis was to examine the function of several key components of this pathway, which had been identified in the midgut transcriptome, namely insulin receptor (IrInR), protein kinase B called AKT (IrAKT), and the target of rapamycin (IrTOR). The subsequent objective was to assess the expression profiles in tick tissues of these components, during tick feeding and after detachment using qRT-PCR. Furthermore, the phenotype using RNAi knockdown, injection with insulin receptor antagonist (IRA), and the artificial feeding with the AKT and TOR inhibitors were verified. Finally, the immunization of rabbits with IrInR recombinant protein and the tick infestation were carried out.

Abstract:

Tato diplomová práce se zabývá analýzou insulin receptorové dráhy v klíštěti Ixodes ricinus. Klíšťata jsou obligátní krev sající ektoparazité, přenášející mnoho patogenů jako jsou bakterie, viry a protozoa. Parazité jsou závislí na svých hostitelích skrze příjmu živin pro přežití, vývoj a rozmnožování. Insulin receptorová dráha je silně konzervovaná a reguluje širokou škálu fyziologických a anabolických procesů v závislosti na dostupných živinách. Cílem mé práce bylo ověření funkce komponent insulin receptorové dráhy. Tyto komponenty byly identifikovány ve střevním transkriptomu, konkrétně insulin receptor (IrInR), protein kináza B tzv. AKT (IrAKT) and IrTOR. Dále byla zhodnocena exprese jednotlivých genů v průběhu sání a po plném nasátí pomocí qRT-PCR. V této diplomové práci byl dále posouzen fenotyp po RNAi umlčení, injikování insulin receptor antagonistou (IRA) a umělém krmení klíšťat AKT a TOR inhibitory. Dále byl posouzen vliv imunizace králíků IrInR rekombinantním proteinem na následnou infestaci klíšťat.

Keywords

Ixodes ricinus, insulin receptorová dráha, insulin receptor, RNAi, umělé krmení klíšťat, infestace klíšťat

Jazyk práce: English

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 4. 12. 2019

Obhajoba závěrečné práce

• Vedúci: RNDr. Lenka Grunclová, Ph.D.

UNIVERSITY OF SOUTH BOHEMIA IN ČESKÉ BUDĚJOVICE

Faculty of Science

Master programme / odbor:
Biology / Nbiol-chem