Motolice čeledi Gymnophallidae na Svalbardu

Charlotte ČUHAJOVÁ

Bachelor's thesis

Flukes family Gymnophallidae on Svalbard

Abstract:

Tato bakalářská práce se zabývá molekulárně biologickým potvrzením předpokládaného životního cyklu motolice čeledi Gymnophallidae. Mezihostiteli jsou mlži Mya truncata, Hiatella arctica a definitivním hostitelem je kajka mořská Somateria mollissima. Fixované vzorky motolic byly přivezeny ze Svalbardu, kde byly izolovány z tkání mlžů a kajky. K identifikaci motolic byly použity molekulární metody. Na Svalbardu jsou mlži Mya truncata parazitováni s vysokou prevalencí metacerkáriemi čeledi Gymnophallidae, s menší prevalencí i mlži Hiatella arctica. Oba druhy jsou významnou složkou potravy kajek Somateria mollissima. Je tedy pravděpodobné, že kajka je definitivním hostitelem této motolice. Úkolem této práce je hypotézu potvrdit ztotožněním DNA metacerkárií z mlžů a motolice z kajky. Posledním cílem bylo vypracovat literární rešerši o motolicích čeledi Gymnophallidae. Provedla jsem izolaci DNA jednotlivě z jedinců motolic pomocí tří různých postupů. První izolace byla provedena fenol-chloroformem z materiálu uloženého v pufru TNES. Dále s využitím kitu DNeasy Blood and Tissue (Qiagen), a to s pomocí tekutého dusíku k rozmělnění tkáně a bez tekutého dusíku. Následujícím krokem byla polymerázová řetězová reakce (PCR) amplifikace vnitřních přepisovaných mezerníků (ITS rDNA) a oblasti genu cytochrom oxidasy - podjednotky I (COI) mitochondriální DNA (mtDNA). Získané PCR produkty jsem vizualizovala pomocí elektroforézy a fragmenty o hledané velikosti jsem izolovala pomocí kitů QIAquick Spin (Qiagen) a Gene All Expin Combo (GeneAll). Přečištěné PCR produkty jsem odeslala firmě Seqme, která z nich připravila sekvence. Totožnost s metacerkáriemi Hiatella arctica nebyla prokázána, pravděpodobně z důvodu špatné amplifikace DNA metacerkárie z Hiatella arctica nebo nedostatku získané templátové DNA v PCR. Následné klonování DNA metacerkárie z Hiatella arctica se nezdařilo. Juvenilní motolice čeledi Gymnophallidae izolovaná ze střeva kajky je totožným druhem s metacerkáriemi z Mya truncata.

Abstract:

This thesis deals with the molecular biological confirmation of anticipated life cycle of gymnophallid trematode. Specific intermediate hosts are bivalves Mya truncata, Hiatella arctica and final host is eider Somateria mollissima. Fixed samples of trematodes were brought from Svalbard, where they were isolated from tissues of molluscs and eider. Molecular methods were used to identify trematode species. On Svalbard thw bivalves Mya truncata are parasitized with a high prevalence with metacercariae of family Gymnophallidae, and Hiatella arctica with less prevalence. Both species are an important food component of eider Somateria mollissima. Therefore the eider is probably the definitive host of this trematode. The task of this work is to confirm this hypothesis by identifying DNA from etacercariae and the trematode from eider. The additional task was to prepare literature search about Gymnophallidae family. The trematode DNA isolation was performed by using three methods. First isolation was performed using phenol-chloroform TNES buffer, followed by liquid nitrogen and without liquid nitrogen with the kit DNeasy Blood and Tissue Kit (Qiagen). The next step was a PCR amplification and sequence using ITS and COI. Then, electrophoresis was carried out and the resulting DNA fragments were further isolated and forwarded to Seqme company which carried out the parasite DNA sequencing. Identity with metacercaria from Hiatella arctica has not been clearly demonstrated, because of bad amplification of DNA from trematode from Hiatella arctica. Subsequent cloning DNA trematode from Hiatella arctica failed. Gymnophallid trematode isolated from the eider gut is the identical species as metacercaria from Mya truncata.

Keywords

Motolice, Gymnophallidae, Molekulární, diagnostika, ITS2.2., sekvence, COI, PCR

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 3. 5. 2016

Accessible from:: 3. 5. 2016

Thesis defence

• Supervisor: doc. RNDr. Oleg Ditrich, CSc.

UNIVERSITY OF SOUTH BOHEMIA IN ČESKÉ BUDĚJOVICE

Faculty of Health and Social Studies

Bachelor programme / field:
Specialization in Health Service / Health Technician