Studium interakce protilátek s Bacillus atrophaeus pomocí biosensorů

Mgr. Zdeněk Farka, Ph.D.

Bakalářská práce

Interaction of antibodies with Bacillus atrophaeus studied using biosensors

Anotace:

Cílem práce bylo studium interakcí protilátek s bakterií Bacillus atrophaeus pomocí biosensorů. Protilátky specifické proti této bakterii byly imobilizovány na vhodné převodníky – piezoelektrické krystaly a čipy pro povrchovou plazmonovou rezonanci. Pro měření byly využity systémy QCM Analyzer a Biacore 3000. Bylo zjištěno, že B. atrophaeus se váže pouze na protilátky Ab151 a Ab411. Na ostatní studované protilátky se neváže. Při sendvičovém uspořádání, kdy navázané bakterie byly dále označeny sekundární protilátkou, došlo ke zvýšení citlivosti. Předpoklad, že zařízení Biacore 3000 bude pro měření citlivější než levnější QCM Analyzer, se bohužel nepotvrdil. Bylo ověřeno, že studované protilátky jsou specifické proti sporám bakterie B. atrophaeus. Byly detekovány spory až do koncentrace 10^5 CFU ml−1. Dále bylo zjištěno, že interakce závisí i na způsobu kultivace a purifikace bakterií.

Abstract:

The aim of this thesis was to study interactions of antibodies with bacterium Bacillus atrophaeus using biosensors. Antibodies specific to this bacterium were immobilised on suitable transducers – piezoelectric crystals and surface plasmon resonance chips. QCM Analyzer and Biacore 3000 were used for measurements. It was found out that B. atrophaeus binds only to antibodies Ab151 and Ab411. It does not interact with any other studied antibody. Sensitivity was improved using the sandwich assay format when secondary antibody binds to bacteria captured on the sensor surface. The assumption that Biacore 3000 will be more sensitive than cheaper QCM Analyzer was unfortunately not true. It was proved that antibodies are specific to spores of B. atrophaeus. Concentrations of spores below 10^5 CFU ml−1 were successfully detected. Furthermore, it was found out that binding interactions depend on the method of cultivation and purification of microbes.

Klíčová slova

Bacillus atrophaeus, biosensor, protilátka, QCM, SPR, Antibody

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 9. 5. 2012

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 19. 6. 2012
• Vedoucí: doc. RNDr. Petr Skládal, CSc.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biochemie / Biochemie