Vliv vybraných obalů kryokonzervovaného ejakulátu hřebců na motilitu spermií

Anežka Nehasilová

Diplomová práce

Influence of chosen package of cryopreserved stallion’s ejaculate on sperm motility

Anotace:

Umělá inseminace kryokonzervovaným ejakulátem je jednou z nejrozšířenějších metod reprodukce koní. Oplozovací schopnost kryokonzervovaného ejakulátu je ovlivněna mnoha faktory. Mezi ty nejzákladnější lze zařadit věk, plemeno a individualitu hřebce, techniku kryokonzervace, typ použitého obalu a objem inseminační dávky (ID). Drtivá většina kryokonzervovaného ejakulátu je uchovávána v 0,5 ml pejetách. Alternativou však mohou být i vysokoobjemové ID. Cílem práce je ověřit hypotézu, že hřebčí ejakulát kryokonzervovaný do 0,5 ml pejet vykazuje kvalitnější vlastnosti v porovnání s kryokonzervací do 5 ml aluminiových tub. Hřebci plemene starokladrubský kůň byli odebíráni v Equinním reprodukčním centru Pardubice, Mnětice. Odebrané semeno bylo naředěno komerčním ředidlem GENT a plněno do 0,5 ml plastových pejet a 5 ml aluminiových makrotub. Kryokonzervované ID byly uchovávány v tekutém dusíku při -196 stupňů Celsia. Dávky byly rozmrazovány ve vodní lázni o teplotě 37 stupňů Celsia po dobu 30 až 60 s. Motilita spermií byla po rozmrazení snímána v průběhu hodinové inkubace a hodnocena objektivně pomocí CASA systému. Mezi automaticky měřené parametry patřily celková a progresivní motilita a další kinematické parametry přesněji charakterizující pohyb jednotlivých spermií. Data byla statisticky vyhodnocena na hladině významnosti P < 0,01. Nativní vzorky ejakulátu vykazovaly lepší hodnoty motility spermií než ejakulát po rozmrazení. Ihned po rozmrazení se celková a progresivní motilita spermií mezi jednotlivými obaly nelišila, signifikantně lepších výsledků dosahovaly kinematické parametry motility ve vzorcích ejakulátu kryokonzervovaných v 0,5 ml pejetách. S prodlužující se dobou inkubace se hodnoty všech parametrů motility spermií postupně zhoršovaly. Poklesy jednotlivých parametrů motility spermií byly zřetelné ve vzorcích kryokonzervovaných v 0,5 ml pejetách především v první polovině inkubace, v 5 ml makrotubách spíše v polovině druhé. Obecně lze říci, že hodnoty celkové a progresivní motility se však mezi jednotlivými obaly nelišily, nicméně jednotlivé kinematické parametry dosahovaly signifikantně lepších výsledků v 0,5 ml pejetách. Kolísání mezi jednotlivými parametry a hřebci bylo ihned po rozmrazení znatelné především v hodnotách celkové a progresivní motility. Kryokonzervovaný ejakulát starokladrubských hřebců vykazoval obecně lepší hodnoty motility spermií v 0,5 ml pejetách oproti 5 ml aluminiovým makrotubám.

Abstract:

Artificial insemination of cryopreserved semen is one of the most widespread method of equine reproduction. The fertilising capacity of cryopreserved semen is influenced by several factors including age, breed and individuality of the stallion, freezing technique, type of packaging and volume of the insemination dose (ID). Most of the cryopreserved semen is stored in 0,5 ml straws. However, there are alternatives that use higher volumes. The aim of this study is to verify the hypothesis, that the semen cryopreserved in 0,5 ml straws offered better quality than the semen cryopreserved in 5 ml aluminium tubes. The semen was collected from the Old Kladruber stallions in Equine reproduction centre Pardubice, Mnětice. Collected semen was diluted with the commercial diluent GENT and filled to the 0,5 ml plastic straws and 5 ml aluminium makrotubes. Frozen ID were stored in liquid nitrogen (-196 degrees). The samples were thawed in a water bath at 37 degrees within 30 to 60 s. The sperm motility was observed after thawing during one hour incubation and assessed objectively with CASA. Among the automatically evaluated parameters belonged: the total and progressive motility and another kinematic parameters that define the movement of individual spermatozoa. The data was statistically analysed and differences were assumed to be significantly different if P < 0,01. Native semen samples offered better values of sperm motility than semen after thawing. Immediately after thawing, the total and progressive motility did not differ between the individual packages, significantly better results of kinematic parameters of motility were reached in the samples cryopreserved in 0,5 ml straws. All of the parameters of motility progressively worsened during the incubation. The parameters of samples cryopreserved in 0,5 ml straws dropped obviously especially in the first half of incubation, while the samples stored in 5 ml macrotubes rather in the second half of incubation. In general, the values of total and progressive motility, did not differ between the individual packages, however the outcome of kinematic parameters reached significantly better results in 0,5 ml straws. Fluctuations between parameters and stallions were obvious after thawing particularly noticeable were values of total and progressive motility. Cryopreserved semen of Old Kladruber stallions offered generally better values of spermatozoa motility in 0,5 ml straws than in 5 ml aluminium macrotubes.

Klíčová slova

hřebec, inseminační dávka, kryokonzervace, motilita

Keywords

stallion, insemination dose, cryopreservation, motility

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 8. 4. 2016

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Ing. Jiří Šichtař, Ph.D.

Česká zemědělská univerzita v Praze

Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů

Magisterský studijní program / obor:
Genové technologie a šlechtění / Reprodukční biotechnologie