Imobilizace fosfatasy na magnetické nosiče

Mgr. Libor Kubošek

Master's thesis

Immobilization of phosphatase to magnetic particles

Abstract:

Diplomová práce byla zaměřena na imobilizaci kyselé fosfatázy z brambor na komerčně dostupné magnetické částice obalené glyoxalem aktivovanou 4% agarózou, jeho následnou charakterizaci a použití k defosforylaci prasečího pepsinu A. Následující vlastnosti imobilizované kyselé fosfatázy byly porovnány s její volnou formou za použití p-nitrofenylfosfátu jako substrátu: pH optimum, vliv kovových iontů, iontové síly a teploty na její aktivitu, Michaelisova konstanta (Km), stabilita v alkalické oblasti pH, a tepelná a skladovací stabilita. Pro imobilizovaný enzym byla dále zjištěna operační stabilita. Dále byla na magnetické částice obalené glyoxalem aktivovanou 4% agarózou imobilizována alkalická fosfatáza z telecí střevní sliznice. Pro volnou a imobilizovanou formu tohoto enzymu bylo stanoveno pH optimum a zjištěna závislost aktivity na přítomnosti Mg2+ a Zn2+ iontů.

Abstract:

Presented thesis was focused on the immobilization of potato acid phosphatase to commercially available magnetic glyoxal 4% agarose beads, their characterization and subsequent utilization for the dephosphorylation of porcine pepsin A. The following properties of immobilized and soluble acid phosphatase were compared using p-nitrophenyl phosphate as a substrate: pH optimum, effect of metal ions, ionic strength, and temperature on enzyme activity, Michaelis constant (Km), resistance to alkaline pH, and thermal and storage stability. The operational stability of the immobilized enzyme was also investigated. Alkaline phosphatase from calf intestinal mucosa was immobilized to the same magnetic beads as acid phosphatase .The pH optimum and effect of Mg2+ and Zn2+ ions on activity of both enzyme forms were investigated and compared.

Keywords

kyselá fosfatáza z brambor, magnetické částice, imobilizace enzymů, defosforylace, telecí alkalická fosfatáza

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 6. 5. 2010

Thesis defence

• Date of defence: 2. 6. 2010
• Supervisor: prof. RNDr. Zuzana Bílková, Ph.D.

University of Pardubice

Faculty of Chemical Technology

Master programme / field:
Special Chemical and Biological Programmes / Analysis of Biological Materials