Posouzení vhodnosti klonů protilátky anti CD 34 pro stanovení počtu hematopoetických kmenových buněk

Bc. Veronika HORNYCHOVÁ

Master's thesis

Assessment of clones of antibody anti CD34 used for enumeration hematopoietic stem cells

Abstract:

Stanovení počtu CD 34+ buněk je důležitou informací pro transplantaci hematopoetických kmenových buněk. Populace buněk nesoucí tento antigenní znak je po transplantaci zodpovědná za znovuosídlení kostní dřeně a obnovu krvetvorby. Cílem této práce je prostřednictvím mediánu fluorescenční intenzity porovnat komerčně dostupné klony 581, 4H11[APG] a QBEnd-10 protilátky anti CD 34 a otestovat jejich klinické laboratorní použití. Analýza vzorků byla provedena metodou průtokové cytometrie na základě ISHAGE protokolu. Statistická analýza ukazuje, že z těchto tří variant je nejvhodnější klon 581. Výsledek této práce by mohl být nápomocný při volbě komerčního kitu pro stanovení počtu hematopoetických kmenových buněk v souvislosti s nařízením IVDR. Důležitým zjištěním je i to, že pro kvantifikaci a selekci CD 34+ buněk by měly být vybírány protilátky specifické vůči epitopům III. třídy. Vhodnou úpravou by mohla být aktualizace používaného ISHAGE protokolu zařazením odlišení singletů od doubletů do analýzy, což by umožnilo přesnější kvantifikaci buněk.

Abstract:

Determination of CD 34+ cell count is important information for hematopoietic stem cell transplantation. The population of cells carrying this antigenic marker is responsible for bone marrow engraftment and hematopoietic reconstitution after transplantation. The aim of this study is to compare commercially available clones 581, 4H11[APG] and QBEnd-10 anti-CD 34 antibodies through median fluorescence intensity and test their clinical laboratory use. Analysis of samples was performed through use of flow cytometry based on the ISHAGE protocol. Statistical analysis shows that clone 581 is the most suitable of the three variants. The result of this work could be helpful in choosing a commercial kit for the determination of hematopoietic stem cell enumeration in the context of IVDR regulation. Another important finding is that antibodies specific to class III epitopes should be selected for quantification and selection of CD 34+ cells. An adaptation of the ISHAGE protocol that includes the discrimination between singlet and doublet in the assay could be an appropriate modification that would allow a more accurate quantification of cells.

Keywords

Hematopoetická kmenová buňka, marker CD34, ISHAGE, medián fluorescenční intenzity, průtoková cytometrie

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 20. 5. 2024

Thesis defence

• Supervisor: RNDr. Martin Novák, Ph.D.

Palacký University Olomouc

Faculty of Science

Master programme / field:
Biology / Experimental Biology