Analytické stanovení hyaluronové kyseliny v kumulo-oocytárním komplexu prasete za účelem hodnocení kumulární expanze

Ing. Kateřina Zámostná

Doctoral thesis

Analytical assessment of hyaluronic acid in porcine cumulus-oocyte complexes for the evaluation of cumulus expansion

Abstract:

Kumulární expanze kumulo-oocytárního komplexu (COC) představuje důležitý regulační proces meiotického zrání oocytu a lze ji proto využít jako možný biomarker oocytů zrajících v podmínkách in vitro. Kumulární expanze spočívá v produkci extracelulární matrix, která je tvořena především hyaluronovou kyselinou (HA). Kumulární expanze je často hodnocena neinvazivními vizuálními metodami, které jsou subjektivní a tudíž značně nepřesné. Další možností je hodnotit kumulární expanzi prostřednictvím stanovení množství HA, což zajišťuje vyšší přesnost. Cílem práce bylo ověřit aplikovatelnost HA analýzy pro hodnocení kumulární expanze a meiotického zrání oocytu in vitro. Další část práce byla zaměřena na testování vlivu vybraných faktorů na kumulární expanzi in vitro metodou analýzy HA. COCs byly kultivovány v modifikovaném médiu M199 po dobu 8-48 hodin. Vzorky pro HA analýzu byly připraveny v 8-hodinových časových intervalech a následně zpracovány za využití spektrofotometrické metody, která byla vytvořena pro tento účel. V průběhu in vitro kultivace bylo pozorováno zvyšující se množství HA. Porovnáním spektrofotometrické metody s vizuálními metodami hodnocení COCs bylo prokázáno, že naše metoda HA analýzy představuje vhodnou metodou pro hodnocení kumulární expanze in vitro. Výsledky rovněž ukazují, že metoda HA analýzy je vhodná pro testování látek s potenciálním efektem na kumulární expanzi a zrání oocytů in vitro.

Abstract:

The cumulus expansion of cumulus_oocyte complex (COC) is an essential regulating process of oocyte maturation and as such it is a possible biomarker of the in vitro maturing oocytes quality. The cumulus expansion is based on extracellular matrix production, consisted especially in hyaluronic acid (HA) synthesis. Cumulus expansion is usually assessed by non_invasive methods based on visual evaluation with many inaccuracies. On the other hand, analytical measurement of the quantity of HA is one of possible methods to evaluate cumulus expansion precisely. Therefore, this study aimed to verify the applicability of HA analysis for evaluating the cumulus expansion and oocyte maturation in vitro. The next part of this study was focused on the testing of selected factors on cumulus expansion in vitro by HA analysis. The COCs were cultured in modified M199 medium for 8_48 h. The samples for the HA analysis were prepared on an 8_hour time scale, and HA retained in COCs was measured using a spectrophotometric method adapted for this purpose. We observed an increasing quantity of HA during the in vitro cultivation. A compari_son with expanded COCs classification or expansion area proved the proposed method of HA analysis suitable for the evaluation of cumulus expansion in vitro. The HA analysis is a suitable method for testing compounds which potencial affects cumulus expansion or maturation of oocytes in vitro.

Keywords

kumulární expanze, spektrofotometrie, meiotické zrání, glykosaminoglykany

Keywords

cumulus expansion, spectrophotometry, meiotic maturation, glycosaminoglycans

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 10. 4. 2017

Thesis defence

• Supervisor: prof. Ing. Jaroslav Petr, DrSc.
• Reader: Michal Ješeta, externi

Czech University of Life Sciences Prague

Faculty of Agrobiology, Food and Natural Resources

Doctoral programme / field:
Animal Science / General Animal Science