Vliv aktivované a neaktivované plazmy bohaté na trombocyty (PRP) na proliferaci lidských osteoblastů a fibroblastů in vitro

MUDr. Jan Slapnička, Ph.D.

Doctoral thesis

Effects of activated and nonactivated plateled-rich plasma on proliferation of human osteoblasts and fibroblasts in vitro

Abstract:

Anotace: Studie hodnotí výsledky vlivu rozdílných koncentraci aktivované a neaktivované plazmy bohaté na trombocyty (PRP) na proliferační aktivitu lidských osteoblastů a fibroblastů in vitro. PRP byla získána od zdravého dobrovolného dárce. Odběr byl proveden v krevní bance pomocí separátoru krevních elementů. K aktivaci trombocytů v PRP byl použit humánní thrombin, který byl rozpuštěn v 1 ml dihydrátu chloridu vápenatého o koncentraci 4,4 mg/ml. K vzorkům s aktivovanou PRP bylo přidáno 0,02 ml roztoku trombin/dihydrát chloridu vápenatého. Byly připraveny kultivační láhve s obsahem 10, 25, 50, 75% aktivované, neaktivované PRP a kontrolní vzorky obsahující pouze kultivační médium (bez přidání PRP).Vlastní měření proliferační aktivity osteoblastů a fibroblastů následovalo za 24, 48 a 72 hodin od přidání PRP. U osteoblastů byla nejvyšší proliferační aktivita zaznamenána v kontrolním vzorku, který neobsahoval PRP. Osteoblasty, ke kterým byla přidána 10% aktivovaná PRP měli viabilitu nejvyšší ze všech vzorků s přidanou PRP. Při porovnání vzorků s 10% a 25% obsahem PRP, bylo zjištěno, že kultury osteoblastů s aktivovanou PRP dosahují výrazně lepších výsledků, a to po všechny sledované dny. Jejich počet vzrůstá. Naopak kultury s 50% a 75% PRP vykazují pokles proliferace. Nárůst viability fibroblastů ve srovnání s kontrolou byl pozorován u vzorku s 10% neaktivovanou PRP, 10% aktivovanou PRP a 25% aktivovanou PRP. U všech dalších vzorků pozorujeme snížení životaschopnosti fibroblastů. Zatímco u vzorku s 10% aktivovanou PRP pozorujeme rovnoměrný nárůst počtu buněk, u vzorků s 10% neaktivovanou PRP a 25% aktivovanou PRP je vývoj 24 a 48 hodin po přidání PRP srovnatelný s kontrolou a prudký nárůst konstatujeme až 72 hodin po začátku měření experimentu. Nejvyšší počet buněk sledujeme u vzorku s 25% obsahem aktivované PRP 72 hodin po jejím přidání. Výsledky experimentů ukazují, že PRP má v určitých koncentracích stimulační vliv na proliferační aktivitu fibroblastů in vitro. U osteoblastů tento efekt in vitro pozorován nebyl.

Abstract:

Anotace: Studie hodnotí výsledky vlivu rozdílných koncentraci aktivované a neaktivované plazmy bohaté na trombocyty (PRP) na proliferační aktivitu lidských osteoblastů a fibroblastů in vitro. PRP byla získána od zdravého dobrovolného dárce. Odběr byl proveden v krevní bance pomocí separátoru krevních elementů. K aktivaci trombocytů v PRP byl použit humánní thrombin, který byl rozpuštěn v 1 ml dihydrátu chloridu vápenatého o koncentraci 4,4 mg/ml. K vzorkům s aktivovanou PRP bylo přidáno 0,02 ml roztoku trombin/dihydrát chloridu vápenatého. Byly připraveny kultivační láhve s obsahem 10, 25, 50, 75% aktivované, neaktivované PRP a kontrolní vzorky obsahující pouze kultivační médium (bez přidání PRP).Vlastní měření proliferační aktivity osteoblastů a fibroblastů následovalo za 24, 48 a 72 hodin od přidání PRP. U osteoblastů byla nejvyšší proliferační aktivita zaznamenána v kontrolním vzorku, který neobsahoval PRP. Osteoblasty, ke kterým byla přidána 10% aktivovaná PRP měli viabilitu nejvyšší ze všech vzorků s přidanou PRP. Při porovnání vzorků s 10% a 25% obsahem PRP, bylo zjištěno, že kultury osteoblastů s aktivovanou PRP dosahují výrazně lepších výsledků, a to po všechny sledované dny. Jejich počet vzrůstá. Naopak kultury s 50% a 75% PRP vykazují pokles proliferace. Nárůst viability fibroblastů ve srovnání s kontrolou byl pozorován u vzorku s 10% neaktivovanou PRP, 10% aktivovanou PRP a 25% aktivovanou PRP. U všech dalších vzorků pozorujeme snížení životaschopnosti fibroblastů. Zatímco u vzorku s 10% aktivovanou PRP pozorujeme rovnoměrný nárůst počtu buněk, u vzorků s 10% neaktivovanou PRP a 25% aktivovanou PRP je vývoj 24 a 48 hodin po přidání PRP srovnatelný s kontrolou a prudký nárůst konstatujeme až 72 hodin po začátku měření experimentu. Nejvyšší počet buněk sledujeme u vzorku s 25% obsahem aktivované PRP 72 hodin po jejím přidání. Výsledky experimentů ukazují, že PRP má v určitých koncentracích stimulační vliv na proliferační aktivitu fibroblastů in vitro. U osteoblastů tento efekt in vitro pozorován nebyl.

Keywords

plazma bohatá na trombocyty, osteoblasty, fibroblasty, PRP platelet rich plasma, osteoblasts, fibroblasts, PRP

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 19. 5. 2009

Thesis defence

• Date of defence: 21. 5. 2009
• Supervisor: prof. MUDr. Antonín Fassmann, CSc.

Masaryk University

Faculty of Medicine

Doctoral programme / field:
Dentistry (4-years) / Dentistry