Vývoj a optimalizace podmínek vazby sfingolipid ceramid N-deacylázy na magnetické mikročástice

Mgr. Veronika Černá

Diplomová práce

Development and optimization of sphingolipid ceramide N-deacylase immobilization to magnetic microparticles

Anotace:

Předložená diplomová práce byla zaměřena na vývoj a optimalizaci magnetického nosiče s imobilizovanou Sfingolipid ceramid N-deacylázou. Pro katalýzu byl vybrán vhodný porézní magnetický nosič s hydroxylovou funkční skupinou. U připraveného nosiče jsme jeho enzymovou aktivitu charakterizovaly pomocí specifických substrátů Gg4Cer (gangliotetraosyl ceramid), který byl použit pro hydrolytickou reakci a lyso-Gb3Cer (lyso-ceramid trihexosid), který byl použit pro syntetickou reakci. U tohoto nosiče byla také testována operační a skladovací stabilita. Další část diplomové práce byla zaměřena na porovnávání enzymové aktivity solubilní a imobilizované formy Sfingolipid ceramid N-deacylázy v závislosti na teplotě a složení reakčního média. Byly tak určeny vhodné podmínky pro reakci katalyzovanou Sfingolipid ceramid N-deacylázou. Dále naměřené hodnoty byly použity ke stanovení KM pro substrát Gg4Cer (lyso-Gb3Cer). Vzorky byly analyzovány metodou chromatografie na tenké vrstvě s denzitometrickým vyhodnocením a též hmotností spektrometrií.

Abstract:

Presented diploma thesis was focused on development and optimization of Sphingolipid ceramide N-deacylase in magnetic carries. Porous magnetic particle with hydroxyl function group was chosen. We were characterized enzymatic aktivity of carrier by the specific substrate, Gg4Cer (gangliotetraosyl ceramide) for hydrolytic reaction and lyso-Gb3Cer (lyso-ceramide trihexoside) for reverse reaction. The storage and operational stability was also determined at this carrier. Next part of diploma thesis was focused on matching enzymatic activity soluble and immobilized Sphingolipid ceramide N-deacylase depending on temperature and composition of reaction medium. Acceptable conditions for activity of Sphingolipid ceramide N-deacylase were defined. Furthermore we tried to determine value of KM for substrate Gg4Cer and lyso-Gb3Cer. Samples were analyzed by technique thin layer chromatography with densitometric evaluation and by mass spectrometry.

Klíčová slova

sfingolipidy, Sfingolipid ceramid N-deacyláza, magnetický nosič, kovalentní vazba

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 4. 5. 2010

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 1. 6. 2010
• Vedoucí: prof. RNDr. Zuzana Bílková, Ph.D.

Univerzita Pardubice

Fakulta chemicko-technologická

Magisterský studijní program / obor:
Speciální chemicko-biologické obory / Analýza biologických materiálů