Ovariální dynamika holštýnských krav superovulovaných přípravkem obsahující hyaluronan

Hedvika Řimnáčová

Master's thesis

Ovarian dynamics in Holstein cows superovulated with preparation containing hyaluronan

Abstract:

Cílem této práce bylo ověřit, zda superovulace vysokoprodukčních holštýnských krav přípravkem obsahujícím hyaluronan, vyvolá stejnou ovariální odezvu jako standardně používaný superovulační protokol (SOP). Dvacet holštýnských krav bylo rozděleno do dvou skupin - PBS (n = 13) a MAP-5 (n = 7) - a sledováno 6 dní (D0 - D5). Skupina PBS byla léčena standardním SOP, který sestával z osmi i.m. injekcí gonadotropinů podávaných dvakrát denně po dobu čtyř dnů. Skupina MAP-5 byla léčena zjednodušeným protokolem, který zahrnoval dvě i.m. injekce gonadotropinů rozředěných v MAP-5 (kyselině hyaluronové o koncentraci 10 mg/ml), podaných ve 48 hodinovém odstupu. Ovariální odezva krav byla každý den SOP ultrasonograficky monitorována a získané informace (počet a velikost folikulů, počet ovulací ve dnech inseminace a počet CL) byly společně s informacemi o vypláchnutých embryích statisticky vyhodnoceny. Během dní D1, D2 a D3 SOP byl průměrný počet malých folikulů (3 - 5 mm) významně (p < 0,05) vyšší ve skupině MAP-5 než ve skupině PBS. Dále bylo zjištěno, že průměrná velikost folikulů byla signifikantně (p < 0,05) větší ve skupině PBS. Poslední den SOP (D5) byl rozdíl mezi skupinami MAP-5 a PBS (8,3 +/- 0,02 a 9,6 +/- 0,02 mm) největší (p < 0,01), což v kombinaci se zpomaleným růstem mezi posledními dvěma dny SOP ve skupině MAP-5 vedlo k signifikantně (p < 0,05) nižšímu počtu ovulací folikulů (72 %) v těchto dnech než ve skupině PBS (90 %). Počet CL (13 +/- 3,5 v porovnání s 19 +/- 2,9) se mezi skupinami PBS a MAP-5 sice lišil (p < 0,05), avšak v počtu získaných embryí (8 +/- 2,2 v porovnání s 12 +/- 2,8), oplozených oocytů (6,7 +/- 2,4 v porovnání s 7,9 +/- 3,2) a přenositelných embryí (5,2 +/- 2,2 v porovnání s 6,2 +/- 1,9) nebyl nalezen rozdíl (p > 0,05). Dílčí součástí této práce bylo monitorování hemodynamických změn ve stěně folikulů během superstimulační léčby. K tomuto účelu bylo vybráno šest superovulovaných holštýnských krav, které byly každý den SOP vyšetřovány dopplerovskou ultrasonografií. Bylo zjištěno, že během superstimulace dochází ke změnám velikosti krvené plochy folikulu (p < 0,05) i její intenzity (p < 0,05). V D3 byla velikost krvené plochy folikulů signifikantně vyšší než v D2, D4 a D5 a signifikantní rozdíl v intenzitě krvení folikulů byl prokázán mezi D3 a D4. Závěrem lze říci, že zjednodušení SOP rozdělením gonadotropinů do dvou intramuskulárních injekcí obsahujících hyaluronan navozuje stejnou superovulační odpověď jako tradiční SOP u holštýnského skotu.

Abstract:

This study examine whether split-single injection of gonadotropins diluted in hyaluronan could induce the same ovarian response as traditional superovulation protocol (SOP) in high producing Holstein cow. For this investigation, twenty Holstein cows were randomly divided into two groups. PBS group (n = 13) was treated with eight i.m. gonadotropins injections twice a day over four days. MAP-5 group (n = 7) was treated with gonadotropins diluted in MAP-5 (hyaluronic acid of 10 mg/ml concentration) and divided into two i.m. injections administered 48 hours apart. Ovarian response of cows was monitored daily by ultrasonography and these data (the number of follicles, the size of follicles, the number of ovulation during the days of insemination and the number CL) were evaluated and statistically analysed together with data from embryos collection. It was found that the average number of small follicles (3 - 5 mm) was significantly (p < 0,05) higher in MAP-5 group than in PBS group during the first day of SOP (D1, D2 and D3). Furthermore, it was found that the average size of follicles was higher (p < 0,05) in PBS than in MAP-5. The greatest difference in average size of follicle between MAP-5 and PBS was during the last day (D5) of SOP (8.3 +/- 0.02 and 9.6 +/- 0.02 mm), which with combination of growth retardation between the last two days of the SOP (D4 and D5), resulted in significantly (p < 0,05) lower number of follicles ovulations (72 %) during these days in MAP-5 group than in the PBS (90 %). Although, the number of CL (13 +/- 3,5 compared to 19 +/- 2,9) was significantly different (p < 0,05), the number of total embryos (8 +/- 2,2 compared to 12 +/- 2,8), fertilized oocytes (6,7 +/- 2,4 compared to 7,9 +/- 3,2) and transferable embryos (5,2 +/- 2,2 compared to 6,2 +/- 1,9) were not significantly different (p > 0,05) between PBS and MAP-5 groups. Part of this study was monitoring of haemodynamic changes occurring in follicular wall during the superstimulation treatment. For this purpose six superstimulated Holstein cows were examined daily by Doppler ultrasonography during superovulation treatment. It was found that there is a significant change in follicular blood flow area and intensity during superovulation treatment. On D3, the follicular blood flow area was significantly higher than in D2, D4 and D5, and the intensity was significantly different between D3 and D4. We concluded that the split-single i.m. administration of FSH diluted in hyaluronan induce the same superovulation response in Holstein cow as the traditional SOP.

Keywords

FSH, hyaluronan, skot, superovulace, reprodukce

Keywords

superovulation, hyaluronan, reproduction, cattle, FSH

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 18. 4. 2017

Thesis defence

• Supervisor: Ing. Jiří Šichtař, Ph.D.

Czech University of Life Sciences Prague

Faculty of Agrobiology, Food and Natural Resources

Master programme / field:
Genetic Technologies and Breeding / Biotechnology of Reproduction