Vývoj UHPLC-MS/MS metody pro stanovení neurosteroidů v lidském krevním séru a mozkomíšním moku

Bc. Klára BAMBULOVÁ

Diplomová práce

Development of UHPLC-MS/MS method for determination neurosteroids in human serum and cerebrospinal fluid

Anotace:

Neurosteroidy jsou látky významně ovlivňující činnost nervových buněk. Hrají tedy významnou úlohu u řady fyziologických (úzkost, procesy učení a paměti) i patofyziologických funkcí (stres, neurodegenerativní choroby). Tato diplomové práce se zabývá popisem neurosteroidů, jejich metabolismu, účinků i způsobů jejich detekce. Cílem práce bylo porovnání purifikačních metod extrakce na pevné fázi s precipitací proteinů srážedlem a nalezení optimálních podmínek pro UHPLC-MS/MS analýzu. Nejvhodnější purifikační protokol využívající kolony Strata-X společně s optimalizovanou UHPLC-MS/MS analýzou byly následně aplikovány na vzorky krevního séra a mozkomíšního moku pacientů s roztroušenou sklerózou a předpokládaných zdravých dárců. Hladiny neurosteroidů DHEA a testosteronu se lišily pouze fyziologicky, avšak u pacientek s roztroušenou sklerózou došlo ke zvýšení hladin progesteronu v krevním séru. Poznání tvorby neurosteroidů i jejich správnou detekcí může být využito v prevenci a léčbě nejen roztroušené sklerózy, ale i dalších neurodegenerativních a psychiatrických onemocnění.

Abstract:

Neurosteroids are substances that significantly modulate activity of nerve cells. They play an important role in a number of physiological (anxiety, learning and memory processes) and pathophysiological (stress, neurodegenerative diseases) functions. The Master's thesis deals with the description of neurosteroids, their metabolism, physiological effects and detection methods. The aim of this thesis was also to compare protein precipitation with purification methods using solid phase extraction and to find optimal conditions for UHPLC-MS/MS analysis. The most appropriate method, Strata-X column purification and optimized UHPLC-MS/MS analysis were then applied to analyse the neurosteroids in blood serum and CSF samples of patients with multiple sclerosis and presumed healthy donors. DHEA and testosterone levels differed only physiologically, but in patients with multiple sclerosis, levels progesterone in serum have increased. Knowledge of neurosteroid formation and their correct detection can be used to prevent and treat not only multiple sclerosis but also other neurodegenerative and psychiatric diseases.

Klíčová slova

Neurosteroidy, krevní sérum, CSF, SPE, UHPLC-MS/MS

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 9. 5. 2017

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Mgr. Ondřej Novák, Ph.D.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biologie / Experimentální biologie