Validace metody PCR-RFLP pro stanovení laktózové intolerance

Denisa PROSOVÁ

Bakalářská práce

Validation of PCR-RFLP method for determination of lactose intolerance

Anotace:

Laktózová intolerance je nejběžnější potravinovou intolerancí, vyskytující se celosvětově. Jedinci s laktózovou intolerancí nedokáží v tenkém střevě tvořit enzym laktázu, který by štěpil laktózu obsaženou v mléce. Existuje několik možností, jak k tomuto postižení dochází. Praktická část této bakalářské práce je zaměřena na genetický původ laktózové intolerance. V evropské populaci se nejčastěji vyskytují dva polymorfismy genu MCM6, zásadně ovlivňujícího tvorbu laktázy C/T 13910 a G/A 22018. Principielně se jedná se o nové mutace v genu, které zajišťují tvorbu enzymu laktázy i v dospělosti. Cílem práce je vypracovat rešerši vycházející s recentních poznatků publikovaných v odborné literatuře. Kdy budou popsány všechny typy laktózové intolerance a možnosti její diagnostiky, dále např. princip alergie, laboratorní metody použité v mé práci, pravidla pro validaci metody apod Vysvětleny budou také výhody i nevýhody každého testovacího přístupu. V praktické části je cílem provedení validace genetického testu použitého pro stanovení laktózové intolerance a vypracování validačního protokolu, který bude sloužit jako podklad pro mou práci. Genetické vyšetření je založeno na principu PCR RFLP, v rámci metodiky budou popsány laboratorní postupy používané v genetické laboratoři. Výsledkem validace bude zjištění, zda je použitá metoda dostatečně validní pro diagnostiku. Genetická analýza bude zaměřena na dva vybrané polymorfismy C/T 13910 a G/A 22018. Pro validaci bude použit vzorek se známým genotypem, který byl již dříve ověřen sekvenací.

Abstract:

The lactose intolerance is the most common food intolerance occurring worldwide. Individuals having the lactose intolerance cannot produce the laktase enzyme in thein small intestine. This enzyme is able to digest the lactose contained in milk. There are several wals for this disabilitty. The practical part of this bachaleor thesis is focused on the genetic origin of the lactose intolerance. In the population of Europe we can find as the most frequent the two polymorphism of the MCM6 gene that affect the production of laktase C/T13910 and G/A22018. In principle it concerns the new gene station which ensure the production of laktase enzyme even in adult age. The aim of this bachaleor thesis is to creat the research based on the recent knowledge Publisher in the specialized literature. There are gin to be describe all type sof the lactose intolerance and the ways of its diagnostics, futhermore e.g. the princupli of Alleny, the used laboratoř methods, the rule sof validation methods etc.. The pros and cons of every testing approach will be explained. The practical part is aiming at the implementation of the validation of the genetics test used for petting down the lactose intolerance and creating the validation protokol that will serve as a base of my bachaleor thesis. The genetic Cheb-up is based on the PCR-RFLP principle, within the metodology the laboratoř procedures being used in the genetic lab will be described. The validaton will flow into a detection if the applied method is sufficiently valid fot the diagnostics. The genetic analysis will focus on the two selected polymorphism C/T13910 and G/A22018. The sample with a familiar genotype that has already been verifie by sekvenation will be used for validation.

Klíčová slova

laktóza, laktáza, alergie, laktózová intolerance, PCR, RFLP, validace, polymorfismus C/T 13910 a G/A 22018

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 3. 5. 2019

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Mgr. Dagmar Riegert Bystřická, Ph.D.

JIHOČESKÁ UNIVERZITA V ČESKÝCH BUDĚJOVICÍCH

Zdravotně sociální fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Specializace ve zdravotnictví / Zdravotní laborant