Diagnostika Clostridium difficile jako nozokomiální nákazy v Nemocnici České Budějovice a.s. pomocí molekulárně-biologických metod

Denisa ŠTĚRBOVÁ

Bachelor's thesis

Diagnostics of Clostridium difficile as nosocomial infections in Nemocnice ČB a.s. using methods of molecular biology.

Anotácia:

Clostridium difficile se v posledních letech zařadilo na přední příčky původců nozokomiálních nákaz. Produkcí toxinů způsobuje zánětlivé onemocnění střev, které v těch nejtěžších případech končí perforací střeva, ohrožující život pacienta. Proto je důležitá jeho včasná a přesná diagnostika. V laboratoři molekulární biologie a genetiky v Nemocnici ČB a.s. jsem pro tyto účely vyzkoušela následující dvě metody, založené na detekci toxinů. První metodou byly dva obdobné testy od firmy BAG Health Care s názvem ?hyplex? ClosTox? a ?hyplex? ClosTox 027?. Druhou testovanou metodou, založenou na detekci real ? time PCR, byl test ?Xpert C. Difficile? od firmy Cepheid. První zmiňovaná metoda ukázala i přes svoji vysokou citlivost množství nedostatků a to především náročnost provedení a časovou dostupnost výsledků, pohybující se kolem 4 ? 5 hodin. Za zmínku stojí fakt, že touto metodou nelze prokázat binární toxin. Druhá metoda ve výsledku vykazovala sice zanedbatelně nižší citlivost, ale oproti metodě první také výrazné přednosti. Jednalo se zejména o jednoduchost provedení, automatické vyhodnocení výsledků a jejich dostupnost do jedné hodiny. Z těchto důvodů se test ?Xpert C. Difficile? ukázal jako optimální metodou pro stanovení toxinů Clostridium difficile.

Abstract:

Nosocomial infections caused by Clostridium difficile represent a substantial part of hospital-acquired infections in Czech hospitals. Intoxication by toxins produced by Clostridium difficile leads to serious damage to gastrointestinal tract and life of the patient may be in danger. The progress of intoxication could be quick, this is why reliable and time-efficient diagnostic methods are of great importance for efficient treatment of the patients. Bacterial toxins are not produced during the whole life cycle of Clostridium difficile. This is why it is better to detect bacterial DNA which is always present in the bacterial cells, not the toxins. In Nemocnice ČB a.s. (České Budějovice municipal hospital) I compared methods based on toxins detection (?hyplex? ClosTox? and ?hyplex? ClosTox 027? by BAG Health Care) with a method based on DNA detection (real-time PCR ?Xpert C. Difficile? by Cepheid). I found out the real-time PCR method is much quicker. It takes one hour to prepare the samples and to obtain analytical result for this method. Both tests based on toxin detection are much more time consuming. It takes up to 5 hours to complete them. I conclude the real-time PCR is much quicker analytical method and it allows Clostridium difficile detection during all life phases of the bacteria.

Kľúčové slová

Clostridium difficile, nozokomiální nákaza, pseudomembranózní enterokolitida, PCR, real time PCR, produkce toxinů

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 2. 5. 2012

Zverejniť od: 2. 5. 2012

Obhajoba závěrečné práce

• Vedúci: doc. Dr. Ing. Alexandr POPKOV, Ph.D.

UNIVERSITY OF SOUTH BOHEMIA IN ČESKÉ BUDĚJOVICE

Faculty of Health and Social Studies

Bachelor programme / odbor:
Public Health Service / Public Health Protection