Charakterizace populace buněk s vysokou hladinou proteinu p63 v buněčných liniích odvozených od karcinomu prsu

Bc. Kateřina Ceralová

Master's thesis

Characterization of p63-positive cell populations in breast cancer-derived cell lines

Abstract:

Podobně jako ostatní proteiny rodiny p53 působí protein p63 v buňce jako transkripční faktor a může existovat v podobě několika izoforem. Nezkrácená izoforma TAp63 a na N-konci zkrácená ΔNp63 izoforma se každá svým způsobem podílí na epidermálním vývoji, jejich úloha v kancerogenezi však zatím nebyla plně objasněna. Zvýšená hladina proteinu p63 byla identifikována zejména v dlaždicobuněčných karcinomech, ale také u některých typů karcinomů prsu. Předložená práce se zabývá analýzou exprese TP63 v souboru buněčných linií odvozených od karcinomu prsu pomocí metod imunocytochemického barvení, PAGE a western blotu a kvantitativní PCR. Dále byl studován vliv růstových faktorů, chemoterapeutik a antiestrogenů na zastoupení p63-pozitivních buněk v linii MCF-7 metodami průtokové cytometrie a imunofluorescenčního barvení. Ve třetí části práce byl sledován vliv zvýšené exprese ΔNp63 na proliferaci a adhezi nádorových buněk pomocí přístroje xCELLigence a na citlivost vůči cisplatině pomocí MTT testu. V rámci diplomové práce bylo zjištěno, že protein p63 je ve velké míře přítomen ve dvou buněčných liniích, MCF-10A a HCC1806, které jsou negativní pro estrogenní receptory (ER) a patří do skupiny „basal-like“ podle expresního profilu. V malé míře se vyskytuje v liniích BT-20, BT-474, LCC1, LCC9, MCF-7 a T-47D, které jsou pozitivní pro ER a E-cadherin a podle expresního profilu patří převážně k luminálnímu typu. Dále bylo prokázáno, že působení růstových faktorů IGF-I a EGF zvyšuje zastoupení p63-pozitivních buněk, zatímco ošetření cisplatinou a fulvestrantem vede ke snížení podílu p63-pozitivních buněk v linii MCF-7. U buněk MCF-7 zároveň nebyl prokázán vliv zvýšené exprese ΔNp63 na proliferaci, adhezi a citlivost buněk vůči cisplatině.

Abstract:

p63 protein is a transcription factor that exists in several different isoforms similarly to other members of p53 protein family. Full-length TAp63 and N-terminally truncated ΔNp63 isoforms are both important for epidermal development but their role in carcinogenesis has not been elucidated yet. Elevated level of p63 was detected mainly in squamous cell carcinomas but also in some types of breast cancer. This thesis is focused on analysis of TP63 expression in cell lines derived from breast cancer using PAGE and western blot, immunocytochemical staining and quantitative PCR. The influence of growth factors, chemotherapeutic agents and antiestrogen treatment on the proportion of p63-positive cells in MCF-7 cell line was studied by flow cytometry and immunofluorescence staining. In the final part of the thesis the influence of increased level of ΔNp63 on cell properties such as proliferation, adhesion and chemosensitivity was examined using xCELLigence proliferation assay and MTT test, respectively. High level of p63 protein was detected in MCF-10A and HCC1806 cell lines that are estrogen receptor-negative and belong to basal-like breast cancer subgroup according to their expression profile. Low level of p63 was identified in cell lines BT-20, BT-474, LCC1, LCC9, MCF-7 and T-47D that express estrogen receptors and E-cadherin and belong to luminal breast cancer subgroup according to their expression profile. It was also found out that IGF-I and EGF treatment increases the proportion of p63-positive cells in MCF-7 cell line whereas it is decreased after cisplatin and fulvestrant treatment. Furthermore, we were not able to prove any influence of ΔNp63 on proliferation, adhesion and chemosensitivity of MCF-7 cells.

Keywords

p63, ΔNp63, karcinom prsu, cisplatina, kancerogeneze, hormonální receptory, izoformy p63, breast cancer, cisplatin, carcinogenesis, hormonal receptors, p63 isoforms

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 16. 5. 2016

Thesis defence

• Date of defence: 1. 6. 2016
• Supervisor: Mgr. Marta Nekulová, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Master programme / field:
Biochemistry / Analytical Biochemistry