Suchá krevní skvrna jako alternativní biologický materiál v klinické analýze

Bc. Radka Vaňušaníková

Diplomová práce

Dried blood spot as an alternative biological sample in clinical analysis

Abstract:

The diploma thesis, in the theoretical part, describes Dried Blood Spot (DBS). Its focuses on its specifics in terms of pre-analytical and analytical phase, as well as its use not only in the clinical field. The experimental part of the work focuses on the development and optimization of the RP-HPLC method with mass spectrometry detection for the determination of olanzapine (OLA) in human plasma and DBS. In this work, the procedure of OLA extraction from biological matrices was optimized. As a suitable extraction solvent was chosen a mixture of dichloromethane: isopropanol (9:1, v/v) for plasma extraction and ACN: MeOH (9:1, v/v) for DBS extraction, which shows high recovery. The method was validated in the basic parameters. The LOD and LOQ values are 1 ng/ml, respectively 2.9 ng/ml for plasma and 6.6 ng/ml, respectively 19.9 ng/ml for DBS. The developed method was used to determine the level of OLA in the patient human plasma and DBS samples.

Abstract:

Diplomová práca v teoretickej časti popisuje suchú krvnú škvrnu (DBS). Zameriava sa na jej špecifiká z pohľadu preanalytickej a analytickej fázy, ako aj jej využitie nielen v klinickej oblasti. Experimentálna časť práce sa zameriava na vývoj a optimalizáciu metódy RP-HPLC s hmotnostne spektrometrickou detekciou na stanovenie olanzapínu (OLA) v ľudskej plazme a DBS. V rámci tejto práce bol optimalizovaný postup extrakcie OLA z biologických matríc. Ako vhodné extrakčné činidlo bola zvolená zmes dichlórmetán : izopropanol (9:1, v/v) na extrakciu plazmy a ACN : MeOH (9:1, v/v) na extrakcie DBS, ktoré vykazujú vysokú výťažnosť. Metóda bola validovaná v základných parametroch. Hodnoty LOD a LOQ sú 1 ng/ml, resp. 2,9 ng/ml pre plazmu a 6,6 ng/ml, resp. 19,9 ng/ml pre DBS. Vyvinutá metóda bola použitá k stanoveniu OLA v pacientskych vzorkách plazmy a DBS.

Klíčová slova

suchá krvná škvrna, ľudská plazma, olanzapín, HPLC, MS, LC-MS, dried blood spot, human plasma, olanzapine

Jazyk práce: slovenština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 1. 6. 2021

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 28. 6. 2021
• Vedoucí: Mgr. Marta Pelcová, Ph.D.
• Oponent: Mgr. Ondřej Peš, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biochemie / Analytická biochemie