Efekty vybraných lipofilních organických kontaminantů prostředí v plasmatické membráně jaterní epiteliální linie WB-F344

Bc. Klára HARMANOVÁ

Master's thesis

Effects of selected lipophilic organic enviromental contaminants on plasma membrane in liver epithelial WB-F344

Anotácia:

Tato práce byla zaměřena na popis efektů ?-, ?- a ?-HBCD in vitro v plasmatické membráně v potkaní jaterní epiteliální linii WB-F344. Cílem teoretické části bylo shrnout dosavadní poznatky o HBCD, jejich vlastnostech a toxicitě. Samostatné kapitoly jsou také věnovány struktuře a funkci mezerových a adherentních spojů, regulaci buněčného cyklu a apoptóze. V experimentální části bylo úkolem sledovat působení jednotlivých isomerů HBCD na buňky linie WB-F344. Stanovenými parametry byly cytotoxicita, apoptóza, buněčný cyklus a inhibice komunikace zprostředkovaná mezerovými spoji (GJIC). Byly také detekovány hladiny proteinů konexinu 43, základní stavební jednotky mezerových spojů, a MAP kinázy ERK1/2, která hyperfosforyluje konexin 43, což vede k jeho degradaci. Dále byly měřeny hladiny proteinů E-kadherinu a ?-kateninu, které jsou klíčovými proteiny adherentních spojů. Na úrovni mRNA byla zjišťována změna exprese genu Axin2, jenž je cílovým genem Wnt/?-kateninové dráhy. Isomery HBCD v různé míře inhibují GJIC a suprimují Wnt/ ?-katenin-dependentní genovou expresi; mohou tedy in vivo působit vývojovou toxicitu a nádorovou promoci.

Abstract:

This work was focused on description of effects ?-, ?- a ?-HBCD in vitro on cell plasma membrane in rat liver epithelial WB-F344 cell line. Theoretical part summarises recent information on HBCD isomers, their properties and toxicity. Additionally, structure and function of gap junctions, adherent junctions, cell cycle and apoptosis were characterized. In the experimental part, toxic effects of isomers HBCD in WB-F344 cells were characterized. The parameters under study included induction of cytotoxicity and apoptosis, regulation of cell cycle and inhibition of gap junction intercellular communication (GJIC). Modulation of levels and phosphorylation status of connexin 43, which forms gap junciton, and MAP kinase ERK1/2, which hyperphosphorylated Cx43 and started its degradation. The levels of E-cadherin and ?-catenin, the proteins constituting adherent junctions, were also examined. Expression of Axin2 mRNA, a target gene of Wnt/ ?-catenin signaling pathway, was determined as well. HBCD isomers inhibited GJIC and suppressed Wnt/ ?-catenin-dependent gene expression; these effects may be involved in developmental toxicity and tumor promoting activity of HBCD in vivo.

Kľúčové slová

HBCD, WB-F344, buněčný cyklus, apoptóza, cytotoxicita, mezerové spoje, E-kadherin, ?-katenin, konexin 43, pERK 1/2

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 23. 4. 2012

Zverejniť od: 23. 4. 2012

Obhajoba závěrečné práce

• Vedúci: RNDr. Miroslav Machala, CSc.

PALACKÝ UNIVERSITY IN OLOMOUC

Faculty of Science

Master programme / odbor:
Biochemistry / Biochemistry