Různé metodické přístupy za účelem snížení exprese podjednotek komplexu I u hmyzích forem \kur{Trypanosoma brucei}

Bc. Barbora HEROUTOVÁ

Master's thesis

Abstract:

Komplex I (NADH ubichinon oxidoreduktáza) je největší proteinový komplex elektronového transportního řetězce v mitochondrii, ale jeho aktivita není pro T. brucei esenciální. Aplikovali jsme několik genetických metod k vytvoření buněčných linií T. brucei bez komplexu I. Metodické přístupy zahrnovaly i) RNAi pojednotky NDUFA6, ii) knock-out NDUFA6 pomocí CRISPR/Cas9, iii) knock-out podjednotky NUBM pomocí homologní rekombinace. Vytvořené nástroje umožní odhalení role komplexu I v jiných stádiích parazita T. brucei.

Abstract:

Complex I (NADH:ubiquinone dehydrogenase) is the largest protein complex of the mitochondrial electron transport chain, but its presence and activity are not essential for the growth of two life cycle stages of Trypanosoma brucei. Here, we implemented various genetic methods to generate T. brucei cell lines that will lack or will have decreased levels of this complex. The methodological approaches included i) RNA interference of NDUFA6, a subunit predicted to be essential for the structural integrity, and of NUBM, a subunit essential for the complex I activity; ii) generation of double knock-out of NDUFA6 using CRISPR/Cas9; iii) generation of double knock-out of NUBM using homology replacement. These generated tools will help us to elucidate if this highly conserved complex is essential for other life cycle stages of this medically important parasite

Keywords

komplex I, NADH ubichinon oxidoreduktáza, trypanosoma brucei, knock-out, RNAi, hmyzí stádium

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 13. 4. 2022

Thesis defence

• Supervisor: RNDr. Alena Panicucci Zíková, Ph.D.

UNIVERSITY OF SOUTH BOHEMIA IN ČESKÉ BUDĚJOVICE

Faculty of Science

Master programme / field:
Biology / Experimental Biology