Vliv mutace TP53 na expresi cílových genů v nádorové buňce

Bc. Robert Helma

Master's thesis

Influence of TP53 mutations in expression of target genes in cancer cell

Abstract:

Protein p53 je řazen do skupiny molekul, které nazýváme nádorové supresory. Díky schopnosti působit jako sekvenčně specifický transkripční faktor může regulovat řadu procesů, jejichž společným cílem je zachování buněčné homeostázy. U více jak poloviny nádorů se vyskytuje mutovaná forma proteinu (mutp53), která disponuje novými vlastnostmi. Jednou z vlastností mutp53 je i schopnost vazby do oblasti promotorů cílových genů a jejich následná transkripční regulace. Ve většině případů se jedná o geny spojené s nádorovou progresí. V rámci diplomové práce byla provedena analýza exprese cílových genů mutp53 u glioblastomových linií s různým statutem p53. S využitím metody qRT-PCR jsme zjistili, že u mutantních linií U251 (R273H) a Onda11 (R273C) dochází vlivem mutp53 k represi genů spojených s apoptózou či nádorovou supresí a aktivaci genů spojených s progresí. Byly také identifikovány geny, které byly specificky aktivovány či reprimovány pouze v jedné z linií. Na závěr jsme pomocí metody ChIP potvrdili, u uvedených linií, vazbu mutp53 do promotorové oblasti genů spojených s nádorovou progresí a regulací apoptózy.

Abstract:

P53 protein belongs among the large group of molecules which are called tumor suppressors. Due to the ability to act as a sequence specific transcription factor, p53 is able to regulate a variety of processes resulting in cellular homeostasis preservation. More than a half of human tumors contain mutated protein form (mutp53) which has new properties. One feature of mutp53 is the ability to bind to target genes promoters where it can regulate their expression. These genes are mostly associated with tumor progression. In the diploma thesis an analysis of mutp53 target genes expression was performed in glioblastoma cancer cell lines with different p53 status. Using the qRT-PCR, the repression of genes connected with apoptosis and tumor suppression, and activation of genes connected with tumor progression was observed in mutant cell lines U251 (R273H) and Onda11 (R273C). Also genes, specifically repressed or activated just in one of the cell lines were identified. By using ChIP, we confirmed in aforementioned cell lines the binding of mutp53 to the promoter region of genes which are involved in tumor progression and regulation of apoptosis.

Keywords

mutp53, cílové geny mutp53, transkripční aktivita, vazba mutp53

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 16. 5. 2014

Thesis defence

• Date of defence: 9. 6. 2014
• Supervisor: Mgr. Marie Brázdová, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Master programme / field:
Biochemistry / Genomics and Proteomics