Role PPARs ve vyvíjejícím se lidském střevě

Bc. Romana BUKVOVÁ

Master's thesis

Role of PPARs in human developing intestine

Abstract:

Receptory aktivované proliferátory peroxizomů (PPARs) jsou jaderné receptory, které hrají důležitou roli při vývoji a diferenciaci orgánů. Tyto receptory se po aktivaci navázáním specifických ligandů mohou podílet na regulaci genů zapojených v celé řadě biologických procesů, jako je metabolismus, apoptóza či nádorová transformace. Jedny z možných genů, na jejichž regulaci by se tyto receptory mohly podílet, jsou ABC transportéry způsobující mnohočetnou lékovou rezistenci (MDR). Tato diplomová práce se zabývá distribucí izoformy PPAR-gamma v embryonálním lidském střevě v různých fázích nitroděložního vývoje a rolí těchto receptorů (a specifického ligandu ciglitazonu) v nádorové buněčné linii HT-29 odvozené od adenokarcinomu střeva. Současně je studován i vliv receptorů na regulaci ABC transportérů u téže linie. Pro detekci PPAR-gamma v embryonálním lidském střevě v různých fázích nitroděložního vývoje byla zvolena dvoustupňová imunohistochemická metoda, díky níž se podařilo zjistit, že k expresi těchto receptorů dochází již v 7. týdnu vývoje a že míra jejich exprese je závislá na jednotlivých stádiích nitroděložního vývoje. Na základě provedeného testu životaschopnosti buněk byl potvrzen antiproliferační účinek ciglitazonu na nádorovou buněčnou linii HT-29. K poklesu životnosti buněk došlo v závislosti na použité dávce ciglitazonu. Western blot analýzou byla prokázána zvyšující se exprese PPAR-gamma u nádorových buněk ovlivněných ciglitazonem oproti kontrolním neovlivněným buňkám. Změna exprese ABCG2/BCRP a ABCC1/MRP1 u stejných buněk nebyla pozorována.

Abstract:

Peroxisome Proliferator-Activated Receptors (PPARs) are nuclear transcription factors that play an important role in development and differentiation of organs. These receptors are activated by specific ligands and they participate in regulation of genes involved in many biological processes such as metabolism, apoptosis and neoplastic transformation. One of the possible genes which can be regulated by PPARs are ABC transporters that causes Multi-Drug Resistance (MDR). These diploma thesis is focused on the distribution of the isoform PPAR-gamma in the human embryonic intestine at different stages of intrauterine development (IUD) and the role of these receptors (and their specific ligand ciglitazone) in the tumor cell line HT-29 derived from human colon adenocarcinoma. At the same time this thesis studied the influence of these receptors on the regulation of ABC transporters in the same cell line. Detection of PPAR-gamma in human embryonic intestine at different stages of IUD was performed by two-step imunohistochemical method by which was found that the expression of PPAR-gamma occurs in the 7th week of development and the rate of their expression depends on various stages of IUD. The anti-proliferative effect of ciglitazone on human tumour cell line HT-29 was confirmed by the cell viability assay. Ciglitazone inhibited cell viability in a dose-dependent manner. Western blot analysis demonstrated the increased expression of PPAR-gamma in tumor cells affected by ciglitazone compared with control un-treated cells. Changes in expression of ABCG2/BCRP and ABCC1/MRP1 in the same cells was not observed.

Keywords

PPARs, lidské střevo, ABC transportéry

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 30. 7. 2012

Accessible from:: 30. 7. 2012

Thesis defence

• Supervisor: Prof. MUDr. Jiří Ehrmann, Ph.D.

PALACKÝ UNIVERSITY IN OLOMOUC

Faculty of Science

Master programme / field:
Biology / Molecular and Cell Biology