Metody chemické detekce bilirubinu v mozkomíšním moku

Michaela HAJDUČKOVÁ

Bachelor's thesis

Methods of Chemical Detection of Bilirubin in Cerebrospinal Fluid

Abstract:

Subarachnoidální krvácení vzniká spontánní rupturou aneurysmatu mozkových tepen, které když začne krvácet do prostoru mezi mozkem a lebkou. Projevuje se mimo jiné také ukrutnou bolestí hlavy, proto, je potřeba každou těžkou bolest hlavy považovat za možné SAK ohrožující pacienta na životě. Bezprostředně po vzniku krvácení je CT nebo NMR v prvních 24 hodinách úspěšné v odhalení až 95% subarachnoideální krvácení. Po 48 hodinách však klesá podíl rentgenologicky diagnostikovatelných případů až na 50%. Z tohoto důvodu se v posledních letech rozvinula metoda chemické detekce krvácení do centrální nervové soustavy založená na přímé spektrofotometrii mozkomíšního moku. Zatímco technické provedení spektrofotometrie je dnes v době spektrofotometrů napojených na PC velmi snadné, interpretačně je toto vyšetření stále složité. Proto bylo cílem této bakalářské práce, detekci možného krvácení do CNS automatizovat, tudíž adaptovat chemickou detekci bilirubinu na biochemický analyzátor Abbott Architect ci2800. Referenční rozmezí pro komerčně dostupné soupravy, pro stanovení sérového bilirubinu bývá 17?mol/l, což je 100násobně více než hodnoty, které je nutné měřit v mozkomíšním moku. Bylo tedy nutné vyjít z některé komerční soupravy a tu udělat 100krát citlivější. Pomocí literatury jsme dospěli ke čtyřem potenciálním metodikám stanovení bilirubinu v mozkomíšním moku. Získané hodnoty ukázaly, že nejlepší výsledky má reakce bilirubinu s diazotovanou soli 2,4-dichloranilinu při absorpčním maximu 546nm. Chemické stanovení bilirubinu v mozkomíšním moku se nyní provádí rutinně v každém vzorku.

Abstract:

Subarachnoid haemorrhage is caused by spontaneous rupture of brain artery aneurysm which bleeds into space between skull and brain. The main symptom of subarachnoid haemorrhage is severe headache, therefore every headache must be considered a symptom of possible life threatening subarachnoid haemorrhage. There is 95% probability of detecting subarachnoid haemorrhage by CT or MRI during 24 hours after first symptoms, which decreases to 50% during 48 hours after symptoms onset. To overcome this insensitivity of diagnostic imaging chemical detection of haemorrhage by direct spectrophotometry of cerebrospinal fluid was developed in recent years. While the procedure of making spectrophotometry record is simple, using modern PC driven automatic spectrophotometers, the interpretation of spectrophotometric record is still rather complicated. The aim of this thesis is to automatize detection of possible subarachnoid haemorrhage by optimizing the procedure of detection of cerebrospinal fluid hemoglobin for Abbott Architect ci 8200 automatic biochemistry analyzer. Cut off limit for serum bilirubin is 17?mol/l, the levels of bilirubin in cerebrospinal fluid are 100 times lower. Our strategy was to use some commercially available bilirubin kit and make it 100 times more sensitive. We choose 4 feasible procedures by background research. Our tests performed showed, that reaction with diazoted salt of 2,4-dichloraniline measured at 546 nm wavelength gives the best results. Automated measurement of bilirubin is now routinely performed in every analyzed sample of cerebrospinal fluid in our laboratory.

Keywords

bilirubin, mozkomíšní mok, spektrofotometrie

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 18. 1. 2010

Accessible from:: 18. 1. 2010

Thesis defence

• Date of defence: 1. 2. 2010
• Supervisor: MUDr. Petr Kubáč

University of Ostrava

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Chemistry / Chemistry