Změny proteomu plasmatické membrány tabáku vyvolané elicitiny

Mgr. Michaela Karhánková

Bakalářská práce

Changes in tobaco plasma membrane proteom trigered by elicitine treatment

Anotace:

Kryptogein je proteinový elicitor patřící mezi elicitiny, který je sekretovaný oomycetou Phytophthora cryptogea. U rostlin Nicotiana tabacum vyvolává silnou obrannou odpověď, která vede k nekróze tkáně a následně k indukci rezistence proti dalšímu působení stresových faktorů. Mutantní forma kryptogeinu V84F má pozměněnou schopnost vázat steroly a lipidní látky, kdy vazba sterolů je často spojována s biologickou aktivitou elicitinů. Suspenzní kultura tabáku Nicotiana tabacum (var. Xanthi), se inokulovala vodou, X24 (wild-type kryptogein) a mutantní formou kryptogeinu V84F. Následně byla provedena 2D-BN-elektroforéza, ze které byla vytvořena proteinová mapa. Programem PDQuest byla provedena analýza spotů u 2D gelů s vodou a s X24. 2D gely s V84F nebyly v našem experimentu analyzovány kvůli špatné denzitně. U spotů u kterých byl nalezen signifikantní rozdíl, byly vyříznuty a poslány na LC-MS/MS analýzu s cílem identifikace. Ze 16 zaslaných spotů bylo 11 úspěšně identifikováno.

Abstract:

Protein cryptogein is an elicitor from a family of proteins called elicitins, which is secreted by an oomycete Phytophthora cryptogea. It is responsible for a strong defense response in Nicotiana tabacum, leading to tissue necrosis and induction of resistance against other stress factors. The mutant form of cryptogein called V84F has altered ability to bind sterols and fatty acids, where the ability to bind sterols seems to isme an important factor in biological activity of the protein. Suspension culture of Nicotiana tabacum (var. Xanthi) cells was inoculated with water, X24 (wild-type cryptogein) and cryptogein mutant V84F. Afterwards protein map was created with 2D-BN-electrophoresis. Program PDQuest was used to analyze spots on the 2D gels with water and X24. V84F 2D gels were not analyzed in our experiment, due to insufficient density. Spots demonstrating significant differences were cut out and sent for LC-MS/MS analysis with the goal of identifying them. From the total of 16 sent spots, 11 were successfully identified.

Klíčová slova

Nicotiana tabacum, kryptogein, plasmatická membrána, dvourozměrná gelová elektroforéza, analýza proteinů, cryptogein, plasma membrane, two dimensional gel elektrophoresis, analysis of proteins

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 14. 5. 2012

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 19. 6. 2012
• Vedoucí: doc. Mgr. Jan Lochman, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biochemie / Biochemie