Príprava rekombinantných proteínov OspA rodu Borrelia (B. burgdorferi, B. garinii, B. afzelii)

Margaréta VOLNÍKOVÁ

Bachelor's thesis

Preparation of recombinant OspA proteins of the genus Borrelia (B. burgdorferi, B. garinii, B. afzelii)

Anotácia:

Lymská borelióza je najrozšírenejším ochorením prenášaným zvieracími vektormi v Severnej Amerike, Európe a Ázii. Pôvodcom je druhová skupina Borrelia burgdorferi sensu lato, zahŕňajúca niekoľko druhov, ktorých geografické rozšírenie je odlišné. Spôsobuje širokú škálu komplikácií a postihuje v tele viaceré systémy. Vedomosti ohľadom patogenézy, diagnostiky a liečby tohto ochorenia sa v poslednom čase výrazne prehĺbili, problematika vakcinácie však zostáva stále nedoriešená. Imunogénom vhodným pre vakcináciu sa ukázal byť OspA, ktorý sa nachádza vo vonkajšej membráne týchto baktérií. Problém odlišných sérotypov je v súčasnosti riešený tvorbou rekombinantných proteínov pozostávajúcich z častí OspA viacerých klinicky relevantných druhov borélií. Experimentálna časť tejto bakalárskej práce je zameraná na prípravu rekombinantného proteínu, konštruktu zloženého z troch fragmentov OspA rôznych druhov. Tento proteín bol exprimovaný v baktériách Escherichia coli, z ktorých bol izolovaný a purifikovaný. V časti tohto konštruktu dochádzalo k štiepeniu za vzniku monoméru, ktorý obsahoval časť s afinitnou značkou a bol vo vzorkách detegovaný spolu s pôvodným trimérom.

Abstract:

Lyme disease is the most common disease transmitted by animal vectors in North America, Europe and Asia. It is caused by the species group Borrelia burgdorferi sensu lato, which includes several species whose geographical distribution is different. It causes a wide range of complications and affects several systems in the body. Knowledge about the pathogenesis, diagnosis and treatment of this disease has significantly deepened recently, but the issue of vaccination remains unsolved. An immunogen suitable for vaccination has been shown to be OspA, located in the outer membrane of these bacteria. The problem of different serotypes is currently being solved by the preparation of recombinant proteins composed of OspA fragments of several clinically relevant Borrelia species. The experimental part of this bachelor thesis is focused on the preparation of the recombinant protein, the construct composed of three OspA fragments of different Borrelia species. This protein was expressed in Escherichia coli and then was isolated and purified. Part of the protein was cleavaged and formed a monomer which contained an affinity tag and was detected along with the original trimer.

Kľúčové slová

Borrelia burgdorferi, lymská borelióza, OspA, molekulárne klonovanie, rekombinantné proteíny

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 30. 7. 2021

Obhajoba závěrečné práce

• Vedúci: Mgr. Milada Stuchlová Horynová, Ph.D.

Palacký University Olomouc

Faculty of Science

Bachelor programme / odbor:
Biology / Molecular and Cell Biology