Vývoj a validace metody pro stanovení olanzapinu a jeho metabolitu desmethylolanzapinu v séru

Bc. Monika Goišová

Diplomová práce

Development and validation of the method for determination olanzapin and its metabolite desmethylolanzapin in serum

Anotace:

Olanzapin je derivát thienobenzodiazepinu a jako účinné antipsychotikum se užívá k léčbě psychotických onemocnění, například schizofrenie. Olanzapin se vykazuje velmi vysokou afinitou k dopaminergním a serotoninergním receptorům, proto je podáván ve velmi nízkých dávkách – celková denní dávka je obvykle 5–20 mg. Olanzapin je jaterními enzymy rozsáhle metabolizován. Je známo asi 10 metabolitů, které jsou pravděpodobně neaktivní. Cílem této práce bylo vyvinout chromatografickou metodu pro stanovení olanzapinu a desmethylolanzapinu a následně ji validovat v základních parametrech. Při metodě byla použita kolona Luna C18 150 mm × 2 mm, 3 µm, mobilní fáze ze směsi metanolu a 10 mM kyseliny octové upravená na pH 4,0. Celková délka analýzy byla 9,2 minut. Teplota kolonového prostoru byla 30 °C. Pro extrakci byla zvolena LLE metoda pomocí diethyletheru, analyty byly detekovány pomocí DAD při 254 nm. Bylo dosaženo limitů detekce OLA 5,5 ng/ml, DMOLA 6,8 ng/ml a kvantifikace OLA 18,3 ng/ml a DMOLA 22,6 ng/ml. Metoda byla validována v parametrech – opakovatelnost v rámci dne, preciznost v rámci dne a byla ověřena robustnost metody při změnách pH mobilní fáze a teploty kolonového prostoru.

Abstract:

Olanzapine is a derivative of thienobenzodiazepine, and it is used as an effective antipsychotic to treat psychotic disorders such as schizophrenia. Olanzapine has a very high affinity for dopaminergic and serotonergic receptors, therefore it is given in very low doses - the total daily dose is usually 5-20 mg. Olanzapine is extensively metabolized by the liver enzymes. About 10 metabolites are known to be probably inactive. The aim of this work was to develop a chromatographic method for the determination of olanzapine and desmethylolanzapine and subsequently validate it in the basic parameters. The method used a Luna C18 150 mm × 2 mm, 3 µm column, mobile phase from a mixture of methanol and 10 mM acetic acid adjusted to pH 4.0. The single run of analysis was 9.2 minutes. The temperature of the column space was 30 °C. The LLE method with diethyl ether was selected for the extraction, the analytes were detected by DAD at 254 nm. Detection limits for OLA and DMOLA were 5,5 ng/ml, 6,8 ng/ml, respectively and limit of quantification 18,3 ng/ml for OLA and 22,6 ng/ml for DMOLA. The method was validated in the parameters - repeatability within the day, precision within the day and the robustness of the method with changes in the pH of the mobile phase and the temperature of the column was verified.

Klíčová slova

olanzapin, desmethylolanzapin, klozapin, UHPLC, schizofrenie, antipsychotikum, DAD detekce, olanzapine, desmethylolanzapine, clozapine, schizophrenia, antipsychotics, DAD detection

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 16. 6. 2020

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 8. 7. 2020
• Vedoucí: doc. PharmDr. Jan Juřica, Ph.D.
• Oponent: Mgr. Marta Pelcová, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biochemie / Analytická biochemie