Sérologický průkaz lymeské boreliózy

Iveta NOVÁKOVÁ

Bakalářská práce

Serological evidence of Lyme borreliosis

Anotace:

Tématem této bakalářské práce je zpracování problematiky lymeské boreliózy. Onemocnění lymeské boreliózy je rozšířeno po celém světě. Původcem jsou různé druhy borelií dle geografického výskytu. Je to onemocnění, jehož přenašečem na našem území je hlavně klíště rodu Ixodes ricinus (v jiných oblastech světa jsou to i jiné druhy). Vyskytují se ve vlhkém prostředí, například v lese nebo ve vysoké trávě. Z toho vyplývá, že více ohroženi jsou lidé, kteří se v těchto lokalitách více vyskytují. Jako jsou příkladně lesníci, ale i děti, které v přírodě tráví více volného času. Lymeskou boreliózu můžeme rozdělit dle pozorovaných příznaků na tři stádia: časně lokalizované, diseminované a pozdní perzistentní stádium. Jako prvotním příznakem boreliózy je nejčastěji uváděna tvorba erythema migrans (EM). EM je vytvoření oválné načervenalé skvrny na kůži, v místě kde bylo přisáté klíště, která může postupem času samovolně vymizet. Jako další příznaky se dají uvést: boreliový lymfocytom, konjuktivitida, neuroborelióza, lymeská karditida a mnoho dalších. Proto pokud jdeme do oblastí, které jsou typická pro výskyt klíšťat, je dobré využít doporučovaných preventivních opatření před přisátím těchto roztočů. K léčbě lymeské boreliózy se využívají antibiotika, které jsou podány pacientovi až po zjištění onemocnění LB. K antibiotické léčbě se používají hlavně: cefalosporiny, makrolidy, tetracykliny nebo peniciliny. Vždycky záleží na tom, v jakém stádiu antibiotika podáváme i na tom, zda pacient má typické klinické příznaky LB. Pro laboratorní diagnostiku lymeské boreliózy se využívají přímé a nepřímé metody. Mezi přímé diagnostické metody se řadí kultivace borélií, hybridizace, imunoelektronová mikroskopie a metoda PCR (polymerázová řetězová reakce) na průkaz boreliové DNA. Dnes je z těchto metod převážně využívána metoda PCR. Z nepřímých diagnostických metod se využívá nepřímé imunofluorescence, Western blot (WB) a ELISA testu (Enzyme Linked Immunosorbent Assay). Pomocí těchto metod se stanovují především specifické protilátky třídy IgM a IgG. Cílem této práce bylo vyšetřit vzorky pacientů na lymeskou boreliózu pomocí metody ELISA testu a Western blotu, otestovat tyto metody a následně zhodnotit jejich výsledky. Jednotlivé vzorky sér, likvorů a punktátů ke zpracování mi byly poskytnuty ve Fakultní nemocnici v Plzni na oddělení sérologie a parazitologie. Před vyšetřením se musí vzorky zředit. K metodě ELISA jsem využila přístroj od firmy Dynex, DSX automatizovaný ELISA systém. Kterým se ve vzorcích stanovují protilátky třídy IgM a IgG. Jde o přístroj, kde během jednoho měření je možné vyšetřit od pacientů až 96 vzorků. Využila jsem i možnost, vyzkoušet si sama ruční stanovení ELISA testu, který se dnes moc nevyužívám, především při větším objemu přijatých vzorků. Pro další vyšetření protilátek IgM a IgG, jsem využila Western blotu a to pomocí komerční sady na ruční stanovení. Celkem jsem vyšetřila v testu ELISA 90 vzorků v třídě IgM, kde vyšly 4 hraniční a 4 pozitivní vzorky od pacientů. Stejných 90 vzorků jsem vyšetřila stejnou metodou i ve třídě IgG, kde vyšly 4 pozitivní vzorky. Dále pak metodou Western blot bylo vyšetřeno 98 vzorků. V třídě IgM vyšlo 5 hraničních a 18 pozitivních vzorků, v třídě IgG oproti tomu vyšlo 5 hraničních a 30 pozitivních vzorků. Poté musí odborný lékař zhodnotit výsledky sérologických testů a klinických příznaků a postupovat tak, aby potvrdil lymeskou boreliózu a vyloučil jiná možná onemocnění.

Abstract:

This bachelor thesis deals with Lyme borreliosis (Lyme disease). Lyme disease has a worldwide distribution. It is caused by several species of the Borrelia bacteria that vary according to geographic occurrence. In our country, this disease is transmitted, above all, by hard ticks of the genus Ixodes ricinus (Other genera are prevalent in other parts of the world.). These ticks are present in a wet environment, e.g. in the woods or in high grass. This poses a higher risk for people who stay or work in similar sites; i.e. lumberjacks, but also for children who spend their free time in the great outdoors. According to symptoms Lyme disease can be divided into three stages: stage 1 is called early localized Lyme borreliosis, stage 2 is called early disseminated Lyme disease, and stage 3 is called late disseminated, or persistent Lyme disease. The most frequently reported typical early sign is a rash called erythema migrans (EM). EM is an oval reddish skin eruption created at the site of the tick bite; this skin condition may gradually disappear. Other symptoms are: borrelial lymphocytoma, conjunctivitis, neuroborreliosis, Lyme carditis, etc. Therefore, generally recommended preventive measures should be used before each trip to an area infested with ticks in order to avoid contact with the ticks. Lyme disease is treated with antibiotics that are administered to a patient upon confirmation of the disease. As a rule the following antibiotics are prescribed: cephalosporin, macrolide, tetracycline or penicillin, depending on at what stage of the disease medication is prescribed and whether the patient shows typical Lyme disease symptoms. Laboratory diagnostics of Lyme disease relies on direct and indirect methods. The direct methods include: cultivation of Borrelia, hybridization, immunoelectron microscopy, and the PCR method (polymerase chain reaction) applied to prove the presence of borrelial DNA. Of all the methods, PCR is most often the method of choice. The indirect diagnostic methods are: indirect immunofluorescence, Western blot (WB) and ELISA tests (enzyme linked Immunosorbent Assay). These methods are used mainly to establish specific antibodies of the class IgM and IgG. The aim of this thesis was to analyze patients' samples for the presence of Lyme disease by means of the ELISA test and the Western blot, to test these methods, and to evaluate their results. The individual samples of serums, liquors and punctuates to be analyzed were provided by the Teaching Hospital in Pilsen, specifically by the Department of Serology and Parasitology. The samples must be diluted before examination. The method ELISA involved the use of a device manufactured by Dynex, DSX (an automated ELISA system). This device determines IgM and IgG antibodies in samples and facilitates analysis of up to 96 patient samples during a single measurement. The author of this thesis used this opportunity to try the manual determination of the ELISA test whose use is rather infrequent, especially in situations where a large number of samples need analyzing. The further examination of the IgM and IgG antibodies was accomplished with a Western blot, specifically by means of a commercial set for manual determination. The author applied the ELISA test to a total of 90 samples in the IgM class. 4 samples were borderline and 4 were positive. The same method was used to analyze the same 90 samples in the IgG class where 4 samples were positive. The Western blot method was used to examine 98 samples. The IgM class was borderline in 5 samples and positive in 18 samples. The IgG class was borderline in 5 samples and positive in 30 samples. Following laboratory examination the results of serological tests and clinical symptoms must be considered by a physician who suggests a suitable method to prove Lyme disease and exclude others.

Klíčová slova

Lymeská borelióza, borrelia, ELISA, Western blot

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 5. 5. 2014

Zveřejnit od: 5. 5. 2014

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: RNDr. Karel Fajfrlík, Ph.D.

JIHOČESKÁ UNIVERZITA V ČESKÝCH BUDĚJOVICÍCH

Zdravotně sociální fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Specializace ve zdravotnictví / Zdravotní laborant