Exprese vybraného fúzního proteinu s PDZ3 doménou ZO-1 v buněčné linii Caco-2 a určení jeho subcelulární lokalizace

Petra Bůbelová

Master's thesis

The expression of a selected fusion protein containing PDZ3 domain of ZO-1 in Caco-2 cell line and the determination of its subcellular localization

Anotácia:

Fúzní proteiny jsou složeny ze dvou a více proteinových domén, spojených do jedné molekuly. Kombinace různých proteinových domén, které se přirozeně společně nevyskytují, přináší vzniklým fúzním proteinům nové funkce či vlastnosti, a jejich studium může vést k nalezení nových, atraktivních kombinací, které by se daly využít v biochemickém a molekulárně biologickém výzkumu nebo i ve zdravotnictví či v průmyslových aplikacích. V této práci se zabýváme výhradně fúzními proteiny, obsahujícími PDZ3 doménu proteinu ZO-1, což je multidoménový protein, který je součástí mezibuněčných spojů epiteliálních buněk. Cílem bylo optimalizovat transfekční postup pro těžce transfekovatelnou epiteliální buněčnou linii Caco-2 a pomocí fluorescenční mikroskopie určit subcelulární lokalizaci exprimovaných rekombinantních proteinů. Byla použita dvě chemická transfekční činidla, jetOPTIMUS a Lipofectamine 3000, a fyzikální metoda transfekce, elektroporace, za různých podmínek. Největší účinnosti bylo dosaženo použitím transfekčního činidla jetOPTIMUS, menší účinnost vykazovalo transfekčního činidlo Lipofectamine 3000 a transfekční metoda elektroporace dopadla neúspěšně. Exprese fúzních proteinů, obsahujících PDZ3 doménu proteinu ZO-1, byla pozorována v cytozolu buněk Caco-2.

Kľúčové slová

protein fúzní, protein těsného spojení 1, PDZ3 doména ZO-1, linie buněčná, transfekce, mikroskopie fluorescenční, Caco-2

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 6. 5. 2022

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 10. 6. 2022
• Vedúci: doc. RNDr. Lucie Zemanová, Ph.D.
• Oponent: PharmDr. Hana Navrátilová, Ph.D.

University of Hradec Králové

Faculty of Science

Master programme / odbor:
Chemie / Bioorganická chemie