Faktory indukující monomerizaci 14-3-3 proteinu

Bc. Aneta Kozeleková

Bachelor's thesis

Agents inducing 14-3-3 protein monomerization

Abstract:

14-3-3 proteiny patří do rodiny vysoce konzervovaných eukaryontních proteinů, které jsou zapojeny do regulace různých buněčných procesů. Přirozeně nabývají dimerní struktury, jež je důležitá pro jejich funkci. Disociací dimeru na monomerní podjednotky dochází k regulaci jejich funkce. Bylo předpovězeno, že fosforylace 14-3-3 proteinu na Ser58, umístěném na dimerním rozhraní, způsobuje monomerizaci in vivo. Ačkoliv byla provedena řada studií, skutečný důsledek fosforylace nebyl dosud plně potvrzen, zejména kvůli problémům s přípravou vzorku. Objasnění pravého efektu fosforylace in vitro bylo motivací předložené bakalářské práce. Optimalizace fosforylační eseje umožnila přípravu 14-3-3ζ proteinu, plně fosforylovaného na Ser58, který byl podroben základní biofyzikální analýze. Gelovou elektroforézou za nedenaturujících podmínek bylo odhaleno, že fosforylace na Ser58 jednoznačně vede k monomerizaci 14-3-3ζ proteinu.

Abstract:

14-3-3 proteins are a family of highly conserved eukaryotic proteins that are involved in regulation of various cell processes. They naturally possess dimeric structure, which is important for their function. Dissociation of dimer into monomeric subunits leads to regulation of 14-3-3 protein function. Phosphorylation of 14-3-3 protein at Ser58, located at the dimer interface, was predicted to cause monomerization in vivo. Although many studies were performed, the real effect of phosphorylation has not been fully confirmed so far, especially due to sample preparation issues. Elucidation of the true impact of phosphorylation in vitro was motivation of presented bachelor’s thesis. Optimization of phosphorylation assay enabled the preparation of 14-3-3ζ protein fully phosphorylated at Ser58 that was subjected to basic biophysical analysis. Native-PAGE revealed that phosphorylation at Ser58 undoubtedly results in monomerization of 14-3-3ζ protein.

Keywords

14-3-3 proteiny, 14-3-3ζ, monomerizace, Ser58, fosforylace, sfingolipidy, protein kinasa A, 14-3-3 proteins, monomerization, phosphorylation, sphingolipids, protein kinase A

Language used: English

Date on which the thesis was submitted / produced: 28. 5. 2019

Thesis defence

• Date of defence: 18. 6. 2019
• Supervisor: RNDr. Mgr. Jozef Hritz, Ph.D.
• Reader: Mgr. Jan Novotný, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Chemistry / Biophysical Chemistry