Imunochemická a mikrobiologická metoda stanovení plazmatických a erytrocytárních folátů a vliv přítomnosti antifolátových terapeutik

MUDr. RNDr. Michal Řiháček

Bachelor's thesis

Immunochemical and microbiological determination of plasma and erythrocyte folates and the influence of antifolate therapeutics

Abstract:

Při léčbě nádorových onemocnění se již dlouhodobě v klinické praxi využívají cytostatika, která zasahují do folátového metabolismu. Jedním z těchto přípravků je methotrexát. Klinická aplikace methotrexátu se z velké části opírá o jeho biochemickou kvantitativní analýzu v tělních tekutinách, která poskytuje lékařům informace využitelné k monitorování průběhu léčby a dávkování leucovorinu. Teoretická část práce sumarizuje přehled základních forem kyseliny listové, které se za fyziologických podmínek v lidském těle vyskytují a jejich zařazení do jednotlivých kompartmentů organismu. Rovněž se věnuje vlivu methotrexátu na folátový metabolismus a možnostem jeho aplikace. Cílem experimentální části této bakalářské práce je najít způsob, kterým by bylo možné statimově stanovit intracelulární polyglutamylované formy léčiva, jenž jsou za normálních podmínek přímému stanovení nepřístupné. Byla testována a hodnocena možnost stanovení volného plazmatického methotrexátu na pozadí erytrocytárního lyzátu na přístroji TDxFLxTM. Zároveň byla provedena stanovení intracelulárních folátů přístrojem Elecsys® a mikrobiologickým kitem DRG® Vitamin Folic Acid. Zjistil jsem, že přístroj TDxFLxTM je schopen detekovat plazmatický methotrexát i na pozadí matrice erytrocytárního lyzátu, což by mohlo vést k možnosti jeho využití pro nepřímou analýzu intracelulárního polyglutamylovaného methotrexátu. Ostatní testované metody se pro případné stanovení intracelulárního methotrexátu či folátu nejevily jako vhodné.

Abstract:

When treating malignant diseases, cytostatics affecting folate metabolism such as methotrexate are used widely in clinical practice. When administering methotrexate, physicians need a biochemical quantitative analysis of human body fluids, which gives them needed information on methotrexate concentration to decide how to proceed in further treatment with its antidote, leucovorin. The theoretical part of this thesis presents summary of various folic acid forms, that are physiologicaly present and specifically distributed in human body. Effects of methotrexate on folate metabolism and its clinical applications are also discussed. The focus of the experimental part of this bachelor thesis is to find a fast and robust method for determination of intracellular methotrexate polyglutamates, normaly inacessible to direct detection. A possibility of determining free methotrexate in hemolytic samples was tested and evaluated on TDxFLxTM. Simultaneously experimental determinations of intracellular folates were performed using ElecsysŽ and microbiological kit DRGŽ Vitamin Folic Acid. Results showed, that TDxFLxTM is able to effectively monitor free methotrexate in a hemolytic sample matrix. This method could subsequently be used for indirect determination of intracellular polyglutamylated methotrexate. Other methods tested were not found suitable in terms of detection of possible methotrexate polyglutamates in hemolytic samples.

Keywords

foláty, antifoláty, intracelulární polyglutamáty, methotrexát, statimová imunochemická analýza, mikrobiologická analýza, folates, antifolates, intracelular polyglutamates, methotrexate, statim immunochemical determination, microbiological determination

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 14. 5. 2012

Thesis defence

• Date of defence: 12. 6. 2012
• Supervisor: doc. MUDr. Dalibor Valík, Ph.D.
• Reader: prof. MUDr. Jaroslav Štěrba, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Applied Biochemistry / Applied Biochemistry