Porovnání komerčních a modifikovaných ředidel pro konzervaci ejakulátu u vybraných genových zdrojů hospodářských zvířat

Bc. Michaela Králová

Master's thesis

Comparison of commercial and modified diluents for ejaculate preservation in selected livestock gene sources

Abstract:

Souhrn Česká slepice zlatá kropenatá patří mezi geneticky ohrožené druhy a byla zařazena do genových zdrojů. Pro uchování inseminačních dávek kohoutů uvedeného plemene byla porovnána komerční ředidla ejakulátu drůbeže s přídavkem kryoprotektantu. Do ředidel Poultry media®, Raptac® a NeXcell® byl přidán penetrující kryoprotektant nmethylacetamid v koncentraci 9 %. Inseminační dávky balené v pejetách o objemu 0,25 ml byly vyráběny ze směsného vzorku ejakulátu od 4 kohoutů stejného věku držených ve stejných podmínkách prostředí a výživy v Pokusné a demonstrační stáji ČZU v Praze. Kohouti byli krmeni krmnou směsí s deklarovaným složením vyrobenou pro ČZU v Praze. Odběr ejakulátu probíhal v lednu a únoru 2022. Pomocí CASA iSperm® (Aidmics Biotechnology Co., Ltd, Taipei, Thaiwan) byly hodnoceny parametry celkové motility spermií v doporučeném poměru ředění před mražením a po rozmražení inseminačních dávek. Poškození plazmatické membrány (PMD), přítomnost DNA, poškození akrozomu (ACRD) a dvojí poškození (PAD) bylo hodnoceno pomocí průtokového cytometru (Novocyte 3000®, Acea Biosciences, Aglient, Santa Clara, California, USA). Celková motilita byla na hladině významnosti p <0,0001 nejvyšší u ředidla Poultry media®, nejhorších výsledků dosahovala u ředidla NeXcell® (p <0,05). K nejvyššímu poškození plazmatické membrány došlo na hladině významnosti p <0,0001 u ředidla NeXcell®, k poškození akrozomu u ředidla Poultry media® (p <0,0001) a ke dvojímu poškození na hladině výzmnamnosti p <0,0001 u ředidla NeXcell®. Jako nejvhodnější pro kryokonzervaci spermatu se ukázala ředidla Poultry media® a Raptac® s přídavkem 9% NMA. Jako nejméně vhodné bylo označeno ředidlo NeXcell®. Je třeba brát v úvahu individualitu v kvalitě ejakulátu jak mezi jednotlivci, tak mezi odběrovými dny. Pro stanovení optimálního ředidla s optimální koncentrací kryprotektantu pro výrobu inseminačních dávek drůbeže je třeba provádět další analýzy. Klíčová slova: Kryokonzervace, N-methylacetamid, kohout, ejakulát

Abstract:

Summary The Czech golden spotted hen is a genetically endangered species and has been included in the genetic resources. Commercial diluents of poultry ejeculate with the addition of cryoprotectant were compared for the preservation of insemination doses of roosters of that breed. A penetrating cryoprotectant was added to Poultry media®, Raptac®, and NexCell® extenders n-methylacetamide at a concentration of 9 %. Insemination doses packed in 0.25 ml straws were produced from a mixed sample of ejaculate from 4 roosters of the same age kept under the same environmental and nutritional conditions in the Experimental and Demonstration Barn of the Czech University of Life Sciences in Prague. The roosters were fed with the feed mixture with the declared composition produced for the CULS in Prague. Ejaculate collection was carried out in January and February 2022. Using CASA iSperm® (Aidmics Biotechnology Co., Ltd, Taipei, Thaiwan), the parameters of progressive sperm motility were evaluated at the recommended dilution ratio before freezing and after thawing of insemination doses. Plasma membrane damage (PMD), presence of DNA, acrosome damage (ACRD) and double damage (PAD) were assessed using a flow cytometer (Novocyte 3000®, Acea Biosciences, Aglient, Santa Clara, CA, USA). Total motility was highest for diluent Poultry media® at the significance level p <0.0001, and worst results were observed for diluent NeXcell® (p <0.05). Plasma membrane damage was highest at the significance level p <0.0001 for diluent NexCell, acrosome damage for diluent Poultry media® (p <0.0001), and double damage at the significance level p <0.0001 for diluent NeXcell®. The diluent Poultry media® with the addition of 9% NMA was found to be the most suitable for sperm cryopreservation. The least suitable diluent was NeXcell®. Individuality in ejaculate quality both between individuals and between sampling days should be taken into account. Further analyses are needed to determine the optimal diluent with the optimal concentration of cryoprotectant for the production of poultry insemination batches. Keywords: Cryopreservation, N-methylacetamide, rooster, ejaculate

Keywords

N-methylacetamid, kohout, ejakulát, Kryokonzervace

Keywords

rooster, ejaculate, Cryopreservation, N-methylacetamide

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 19. 4. 2022

Thesis defence

• Supervisor: Ing. Martina Janošíková, Ph.D.

Czech University of Life Sciences Prague

Faculty of Agrobiology, Food and Natural Resources

Master programme / field:
Animal Science / Animal Nutrition and Dietology