Vývoj analytických metod pro výzkum biologicky aktivních látek. Nové metody pro chirální analýzu aminokyselin

Ing. Helena Zahradníčková, Ph.D.

Disertační práce

The development of analytical methods for the study of biologically active compounds. New methods for chiral analysis of amino acids

Anotace:

Předložená disertační práce je věnována studiu reakce proteinotvorných aminokyselin s nově připravenými derivatizačními činidly, fluoralkychlormravenčany, 2,2,3,3,3-pentafluorpropylchlormravenčanem (PFPCF) a 2,2,3,3,4,4,4-heptafluorbutylchlormraven-čanem (HFBCF) a jejich využití v analytickém měřítku. Na nmol a umol hladinách byly prostudovány vznikající reakční produkty a jejich GC separace na kapilárních kolonách. Byly sestrojeny kalibrační křivky pro soubor aminokyselin a vypracována metoda pro kvantitativní stanovení aminokyselin v biologickém materiálu a environmentálních vzorcích. Hlavní část práce byla zaměřena na využití nových derivátů pro chirální dělení enantiomerů důležitých aminokyselin. V práci jsou popsány separační vlastnosti enantiomerů AAs a optimalizována jejich separace na chirální koloně Chirasil-Val. Možnosti praktického uplatnění nově vypracovaných metod byly ověřeny na analýze AAs ve vzorcích přírodních vod, ve vzorcích kultur sinic a při studiu optické čistoty syntetického peptidu Carbetocinu. V rámci práce též byla vypracována doplňková metoda separace diastereoizomerů syntetických homologů leucinu metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie založené na derivatizaci o – ftaldialdehydem a chirálními thiocukry.

Abstract:

This thesis presents the study of the reaction of proteinogennic amino acids with newly synthetised derivatization agents, fluoroalkyl chloroformates, 2,2,3,3,3-pentafluoropropyl chloroformate (PFPCF) and 2,2,3,3,4,4,4-heptafluorobutyl chloroformate (HFBCF) and their utilization in analytical chemistry. The originated reaction products and their separation on capillary columns were studied on the nmol and umol levels using GC. The calibration curves were constructed for the set of amino acids and the method for quantitative determination of amino acids in biological and environmental matrices was elaborated. The main part of the thesis was aimed to the application of new derivatives for chiral separation of amino acid enantiomers. Separation of AAs enantiomers and their separation characteristics on chiral column Chirasil-Val are described. The feasibilities of practical uses of newly elaborated methods were verified on analyses of samples of natural waters, cyanobacterial cultures and in the course of the study of optical purity of synthetic peptid Carbetocine. Within the framework of the work the supplemental method of the diastereoisomeric synthetic leucine homologues separation by high performance liquid chromatography based on the derivatization with o – phthaldialdehyde and chiral thiosugars was worked up.

Klíčová slova

Aminokyseliny, enantiomery, diastereoisomery, derivatizace, chlormravenčany, GC, HPLC / Amino acids, enantiomers, diastereoisomers, derivatization, chloroformates, HPLC

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 6. 6. 2007

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 25. 6. 2007
• Vedoucí: prof. RNDr. Ivan Holoubek, CSc.
• Oponent: prof. RNDr. Josef Malý, CSc., RNDr. Miroslav Flieger, CSc., prof. RNDr. Věra Pacáková, CSc.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Doktorský studijní program / obor:
Chemie / Chemie životního prostředí