Exprese a charakterizace předpokládané rostlinné adenosindeaminasy

Petr DVOŘÁK

Bakalářská práce

Expression and characterization of putative plant adenosine deaminase

Anotace:

Adenosindeaminasy jsou enzymy, které byly nalezeny u prokaryot a některých druhů eukaryot (hmyz, nižší obratlovci, ryby, savci). Existují však pouze omezené informace o těchto enzymech v rostlinách. I když studium v genomových databázích Arabidopsis thaliana a dalších rostlin ukazují přítomnost domnělých genů, nebyly dosud odpovídající proteiny a ani jejich aktivita (deaminace adenosinu) prokázány. Tahle bakalářská práce navazuje na článek Pospíšilová et al., 2008, kde již byla popsána exprese a charakterizace genu At4g04880 z Arabidopsis thaliana kódující domnělou adenosindeaminasu. Výtěžek proteinu však po expresi a následné purifikaci byl velmi nízký. Proto byla experimentální část této práce zaměřena na zvýšení exprese adenosindeaminasy prostřednictvím nalezení optimálních podmínek exprese s následnou kvalitativní purifikací s nízkými ztrátami. Vyřešení těchto podmínek je nevyhnutelné pro získání adenosindeaminasy o vysoké čistotě pro její následnou krystalizaci.

Abstract:

Adenosine deaminases are enzymes which have been found in prokaryotes and in some eukaryotes (insects, lower vertebrates, fish, mammals), but there are just few reports about these enzymes in plants. The studies in the completed genome databases of Arabidopsis thaliana and other plants show the presence of putative genes, but there were not found corresponding proteins and also their activity (deamination of adenosine) was not demonstrated. The aim of this research is connected very close with the article of Pospíšilová et al., 2008, where the expression and characterization of the gene At4g04880 from Arabidopsis thaliana, which codes a putative adenosine deaminase, was described. The experimental part of this thesis was focused on the increase of the adenosine deaminase expression due to previous very low expression yield. For this reason different possibilities were investigated to find the optimal conditions for expression, qualitative purification and decrease of the protein loss. The finding of these conditions is necessary for getting the pure protein, which will be used for the future crystallization.

Klíčová slova

Metabolismus nukleotidů, adenosindeaminasa, možnosti zvýšení exprese, expresní podmínky, purifikace proteinů, SUMO proteasa.

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 7. 5. 2014

Zveřejnit od: 7. 5. 2014

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: RNDr. Lenka Dzurová, Ph.D.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biochemie / Biochemie