Identifikace probiotických baktérií v reálných vzorcích - doplňky stravy a farmakologické preparáty

Bc. Petra Vídeňská, Ph.D.

Diplomová práce

Identification of probiotic bacteria in real samples of food supplements and pharmacological preparates

Anotace:

Probiotika jsou živé mikroorganismy, které příznivě ovlivňují střevní mikroflóru hostitele. Jsou součástí mnoha potravin, zejména mléčných produktů, farmaceutických preparátů a doplňků stravy. Cílem práce bylo nekultivačními postupy prokázat přítomnost deklarovaných druhů probiotických bakterií v šesti různých reálných vzorcích doplňků stravy a farmaceutických preparátů. Byla provedena optimalizace lyze buněk v analyzovaných vzorcích a celková DNA byla izolovaná metodou fenolové extrakce. Kvalita získané DNA byla ověřena pomocí agarózové gelové elektroforézy a spektrofotometricky. Amplifikovatelnost DNA byla ověřena pomocí PCR s primery specifickými pro doménu Bacteria. S DNA byla provedena rodově (rod Bifidobacterium a Lactobacillus) a druhově specifická PCR (Lb. acidophilus, Lb. delbruckei, Lb. casei/paracasei, Lb. fermentum, Lb. rhamnosus, Lb. salivarius, B. breve, B. bifidum, B. infantis, B. animalis, B. longum, Lactococcus lactis) s cílem prokázat přítomnost bakteriálních rodů a druhů , které jsou deklarovány výrobci. U tří preparátů byly detekovány všechny druhy uvedené výrobcem. U jednoho preparátu nebyl detekován žádný deklarovaný druh a u dvou byly detekovány jen některé druhy. Jeden preparát obsahoval druhy, které nebyly deklarovány. Pět preparátů obsahovalo méně bakterií, než uváděl výrobce nebo než by měl probiotický preparát obsahovat.

Abstract:

Probiotics are viable microorganisms, which has a beneficial effect on the host colon microflora. Probiotics strains are part of foods, especially fermented dairy products, pharmaceutical preparations and food supplements. The target of this thesis was to identify declared probiotik species in six different probiotic products by using culture independent approach. Lysis of the cells in analysed samples was optimalised. Total DNA was isolated using phenol extraction method. The quality of DNA was verified by agarose gel electrophoresis and using spectrophotometer. The amplification of this DNA was verified by domain – specific PCR. The identification of target bacteria was performed using genus – specific PCR (genus Bifidobacterium a Lactobacillus) and species – specific PCR (Lb. acidophilus, Lb. delbruckei, Lb. casei/paracasei, Lb. fermentum, Lb. rhamnosus, Lb. salivarius, B. breve, B. bifidum, B. infantis, B. animalis, B. longum, Lc. lactis). The results bacteria identification were compared with results declared by producers. Three products contained all declared species. No declared species were detected in one of the products. In two products some species were detected only. Five products contained lower count of viable bacteria than was declared by producers or than the probiotics products should contain.

Klíčová slova

Probiotika, Lactobacillus, Bifidobacterium, funkční potraviny, PCR

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 14. 5. 2010

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 10. 6. 2010
• Vedoucí: doc. RNDr. Alena Španová, CSc.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biologie / Obecná biologie