Explantátové kultury konopí setého (Cannabis sativa L.)

Bc. Klára ŠANOVCOVÁ

Master's thesis

Explant cultures of hemp (Cannabis sativa)

Abstract:

Konopí seté (Cannabis sativa L.) je jednoletá olejnina čeledi konopovité (Cannabaceae). Má široké využití v průmyslu, medicíně i zemědělství. Obsahuje množství významných látek, z nichž nejznámější jsou 9-tetrahydrokanabinol (THC), kanabidiol (CBD) a kanabichromen (CBC). V rámci diplomové práce byla stanovena účinná sterilizace explantátů, které jsou odvozeny ze zralých a nezralých semen. Bylo stanoveno médium vhodné pro indukci kalusů i pro organogenezi z apikálního meristému. Pomocí Agrobacterium tumefaciens byla provedena transformace různých explantátů dvou odrůd, Finola a USO-31. Expresní vektor pGGG obsahoval reportérový gen GUS a selekční gen nptII, součástí druhého vektoru pLx byl reportérový gen eGFP a selekční gen nptII, a navíc tento vektor obsahoval transkripční faktory. Optimální koncentrace kanamycinu pro selekci byla u obou odrůd 100 mg/l. U transformovaných pletiv byla po 7 a 8 týdnech kultivace zjištěna exprese reportérových genů GUS a eGFP. Stabilní transgenní rostliny nebyly získány.

Abstract:

Cannabis sativa L. is an annual oilseed herb belonging to the Cannabaceae family. It is widely used in industry, medicine and agriculture. It contains lots of secondary metabolites, wich 9-tetrahydrocannabinol (THC), cannabidiol (CBD) and cannabichromene (CBC) are the most common. As part of the diploma thesis, the effective sterilization method of explants from mature and immature seeds was found. A medium for callus induction and organogenesis from the apical meristem was tested. Several types of explants of two cultivars, Finola and USO-31, were transformed using Agrobacterium tumefaciens harboring one of two expression vectors. The expression vector pGGG contained the reporter gene GUS and the selection gene nptII; the second vector, pLx, contained the reporter gene eGFP, the selection gene nptII, and in addition transcription factors. The optimal concentration of kanamycin for selection was 100 mg/l for both varieties. Expression of the GUS and eGFP reporter genes was detected in the transformed tissues after 7 and 8 weeks of cultivation. Stable transgenic plants were not obtained.

Keywords

Cannabis sativa L., explantátové kultury, transformace, Agrobacterium tumefaciens

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 28. 4. 2023

Thesis defence

• Supervisor: Ing. Ludmila Ohnoutková, Ph.D.

Palacký University Olomouc

Faculty of Science

Master programme / field:
Biology / Experimental Biology