Testování účinnosti restrikčních endonukleas

Mgr. Denisa Horáková

Bachelor's thesis

Testing efficiency of restriction endonucleases

Abstract:

Restrikční endonukleasy jsou sekvenčně specifické prokaryotické enzymy, které rozpoznávají a štěpí sekvence dvouřetězcové DNA. Teoretická část bakalářské práce se zabývá zpracováním literární rešerše na dané téma. Praktická část bakalářské práce se zabývá testováním účinnosti vybraných restrikčních endonukleas XbaI, XhoI, NotI-HF a EcoRI-HF. V případě restrikčních endonukleas XbaI a XhoI bylo testování prováděno na běžně používaném vektoru pET-25b(+) určeného pro expresi genu v E. coli. Testování restrikčních endonukleas NotI a EcoRI bylo prováděno na vektoru pcDNA 4/V5-His B, který je určený pro expresi v savčích buňkách, a vektoru pMK-RQ obsahující gen gnt-v a sloužilo k nalezení vhodných podmínek pro genové klonování a vytvoření nového DNA konstruktu vektoru pcDNA 4/V5 His B obsahující gen gnt-v.

Abstract:

Restriction endonucleases are sequence specific prokaryotic enzymes, which recognize and cleave a double-stranded DNA sequence. The theoretical part of the bachelor thesis is focused on the processing of a literature review on the topic. The practical part of the bachelor thesis is focused on testing efficiency of selected restriction endonucleases XbaI, XhoI, NotI and EcoRI. Restriction endonucleases XbaI and XhoI were tested on the base of a commonly used vector pET-25b (+) intended for gene expression in E. coli. The testing of restriction endonucleases NotI-HF and EcoRI-HF was performed on the mammalian expression vector pcDNA 4/V5-His B and pMK-RQ vector containing the gnt-v gene. The testing was used to find suitable conditions for gene cloning and creating a new DNA construct pcDNA 4/V5-His B containing gnt-v gene.

Keywords

Restrikční endonukleasy, Restrikčně-modifikační systém, genové klonování, gen gnt-v

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 14. 5. 2015

Thesis defence

• Date of defence: 8. 6. 2015
• Supervisor: prof. RNDr. Michaela Wimmerová, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Applied Biochemistry / Applied Biochemistry