Studium interakcí proteinů metodou FLIM-FRET a konfokální mikroskopií

Bc. Iveta Vavříková

Master's thesis

Studies on protein interaction by FLIM-FRET and confocal microscopy

Abstract:

Diplomová práce je zaměřena na studium histonů H1, H2B, H3.3 a H4, laminů A a proteinů HP1β a 53BP1 účastnících se reparačních drah DNA. V experimentech byly použity buněčné linie HeLa, HepG2, Lap2α +/+ a -/-. Buněčné linie byly rovněž ovlivněny inhibitorem histonových deacetyláz trichostatinem A (TSA), byl sledován jeho vliv na dynamiku výše uvedených proteinů. Experimenty byly provedeny pomocí pokročilých konfokálních mikroskopických technik, jako je technika FRAP (k měření dynamiku proteinů) nebo techniky FLIM a FLIM-FRET (ke studiu potenciálních interakcí mezi proteiny lamin A a LAP2α). Indukce dvouřetězcových zlomů byla provedena pomocí laseru s vlnovou délkou 405 nm.

Abstract:

The diploma thesis is focused on histones H1, H2B, H3.3 and H4, lamin A and proteins HP1β and 53BP1 involved in the DNA repair pathways. In the experiments cell lines HeLa, HepG2, Lap2α +/+ and -/- were used. Cell lines were also treated with histone deacetylase inhibitor trichostatin A (TSA), to observe its influence on the dynamics of the above mentioned proteins. This study was performed via using advanced confocal microscopy techniques such as FRAP technique (to measure proteins dynamic) or the FLIM and the FLIM-FRET techniques (to observe the potential interactions between lamin A and LAP2α proteins). Induction of double strand breaks was performed using the laser with 405 nm wavelength.

Keywords

Försterův rezonanční přenos energie (FRET), mikroskopické zobrazení doby dohasínání fluorescence (FLIM), FLIM-FRET, obnova fluorescence po fotovybělení (FRAP), lamin A, heterochromatinový protein 1 β (HP1β), p53 vazebný protein 1 (53BP1), histony, Förster resonance energy transfer (FRET), fluorescence lifetime imaging microscopy (FLIM), fluorescence recovery after photobleaching (FRAP), heterochromatin protein 1 β (HP1β), p53-biding protein 1 (53BP1), histones

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 10. 5. 2017

Thesis defence

• Date of defence: 19. 6. 2017
• Supervisor: doc. RNDr. Eva Bártová, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Master programme / field:
Biology / Medical Genetics and Molecular Diagnostics