Srovnání komerčních ředidel a jejich kombinací za účelem zlepšení kryokonzervačních schopností u spermatu beranů valašské ovce

Bc. Johana Uhlířová

Master's thesis

Comparison of commercial extenders and their mixtures for improving cryoconservation abilities Wallachian rams sperm

Abstract:

Cílem této diplomové práce bylo srovnání komerčních ředidel za účelem zlepšení kryokonzervačních schopností u spermatu beranů valašské ovce. Během experimentu byly použity vzorky ejakulátu beranů plemene valašská ovce. Toto plemeno se řadí mezi genetické zdroje, kdy proces kryokonzervace hraje významnou roli v uchování genů tohoto plemene. Předpokládalo se, že komerční ředidla použitá buď samostatně nebo smícháním v definovaném poměru ovlivňují in vitro ukazatele inseminačních dávek po rozmrazení. Měla jsem k dispozici 7 různých ředidel (1. AndroMed, 2. OviXcell, 3. OptiXcell, 4. AndroMed + OviXcell + OptiXcell (1:1:1), 5. Andromed + OviXcell (1:1), 6. Andromed + OptiXcell (1:1), 7. OviXcell a OptiXcell (1:1)). Hodnocení odebraného spermatu probíhalo za pomoci CASA softwaru a průtokové cytometrie. Jako oplození schopné spermie jsem brala ty, které měly vysokou celkovou a progresivní motilitu, neměly poškozený akrozom, poškozenou cytoplazmatickou membránu a měly zachovanou mitochondriální aktivitu. Vyhodnocení probíhalo po ekvilibraci a po rozmrazení. Z našich výsledků vyplývá, že nejlepší celkové motility, progresivní motility a životaschopnosti spermií po rozmrazení bylo dosaženo v ředidle z AndroMedu a OptiXcellu, což přináší překvapivé zjištění. Zároveň z našich výsledků je patrné, že nejhorší variantou pro mrazení beraního spermatu je ředidlo OviXcell. Dosáhlo nejhorších výsledků v celkové motilitě, progresivní motilitě po rozmrazení, životaschopnosti spermií po ekvilibraci i rozmrazení a v ostatních sledovaných parametrech případně nebyly pozorovány signifikantní rozdíly s nejhoršími výsledky. Získaná data poskytují slibné předpoklady pro zlepšení kvality kryokonzervovaného ejakulátu. Do budoucna by bylo vhodné ověřit kvalitu smíchaných ředidel v in vivo podmínkách a zhodnotit míru plodnosti, takto připravených inseminačních dávek. Případně lze vyzkoušet namíchat odlišné poměry námi zvolených kombinací ředidel.

Abstract:

The aim of this diploma thesis was to compare commercial extenders in order to improve the cryoconservation capabilities of Wallachian ram sperm. During the experiment, ejaculate samples from Wallachian sheep were used. This breed ranks among the genetic resources where the cryoconservation process plays a significant role in preserving the genes of this breed. Commercial extenders used either alone or mixed in a defined ratio were hypothesized to affect in vitro parameters of insemination doses after thawing. I had 7 different extenders at my disposal (1. AndroMed, 2. OviXcell, 3. OptiXcell, 4. AndroMed + OviXcell + OptiXcell (1:1:1), 5. Andromed + OviXcell (1:1), 6. Andromed + OptiXcell (1:1), 7. OviXcell and OptiXcell (1:1)). The evaluation of the collected sperm was carried out with the help of CASA software and flow cytometry. As sperm capable of fertilization, I took those that had high overall and progressive motility, did not have a damaged acrosome, damaged cytoplasmic membrane and had preserved mitochondrial activity. The evaluation took place after equilibration and after thawing. Our results show that the best total motility, progressive motility and viability of spermatozoa after thawing were achieved in the extender from AndroMed and OptiXcell, which is a surprising finding. At the same time, our results show that the worst variant for freezing ram sperm is the OviXcell extender. It achieved the worst results in total motility, progressive motility after thawing, sperm viability after equilibration and thawing, and in the other monitored parameters, possibly no significant differences were observed with the worst results. The obtained data provide promising prerequisites for improving the quality of cryoconservation ejaculate. In the future, it would be advisable to verify the quality of the mixed extenders in in vivo conditions and to evaluate the fertility rate of insemination doses prepared in this way. Alternatively, you can try mixing different proportions of our chosen combination of thinners.

Keywords

průtoková cytometrie, CASA, kryokonzervace, sperma

Keywords

flow cytometry, CASA, cryoconservation, sperm

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 16. 4. 2023

Thesis defence

• Date of defence: 16. 5. 2023
• Supervisor: Ing. Martin Ptáček, Ph.D.
• Reader: Jakub Vozaf, externi

Czech University of Life Sciences Prague

Faculty of Agrobiology, Food and Natural Resources

Master programme / specializace:
Biotechnology / Reproduction Biotechnology