Vliv folikulogeneze na efektivitu in vitro fertilizace prasečích oocytů

Ing. Šárka Hanuláková

Doctoral thesis

The effect of folliculogenesis on the efficiency of in vitro fertilization of pig oocytes

Abstract:

Správná selekce izolovaných oocytů respektující úroveň folikulogeneze je jednou z cest, jak zefektivnit stávající postupy. Z tohoto důvodu byla tato disertační práce zaměřena na výzkum změn v distribuci kortikálních granul u odlišných subpopulací prasečích oocytů s rozdílnou meiotickou kompetencí v průběhu folikulogeneze. K experimentům byly použity oocyty z malých (menší nebo rovno 5mm) a středních (5-9 mm) folikulů izolované z předem vybraných ovárií rozdělených podle příslušné fáze estrálního cyklu. Oocyty byly barveny pomocí specifického lektinu PNA, konjugovaného s fluorescenční sondou fluorescein isothiocyanate. K vizualizaci kortikálních granul byl použit laserový konfokální mikroskop. Bylo také prokázáno, že se oocyty s různou meiotickou kompetencí liší ve schopnosti prodělat normální fertilizaci, a že fertilizace in vitro u oocytů s nižší meiotickou kompetencí je doprovázena vyšším výskytem polyspermicky oplozených oocytů. Nebylo však možné potvrdit, že vyšší výskyt polyspermie je způsoben narušením průběhu kortikální reakce

Abstract:

An appropriate selection of isolated oocytes with respect to the level of folliculogenesis is one of the ways to improve current methods. For this reason, this disertation thesis was focused on research of changes in distribution of cortical granules in different subpopulations of porcine oocytes with different meiotic competence during folliculogenesis. Oocytes from small (to less than or equal to 5mm) and medium (5-9 mm) follicles, collected from selected ovaries divided according to the phase of estral cycle, were used for the experiments. The oocytes were stained with PNA conjugated with fluorescent probe fluorescein isothiocyanate. A laser confocal microscope was used for visualization of the cortical granules. The experiment revealed a significant decrease of cortical granules in peripheral region of the ooplasm with increasing meiotic competence of oocytes during maturation in vitro. It also showed that oocytes with different meiotic competence differ in the ability to undergo normal fertilization and that fertilization in vitro in oocytes with lower meiotic competence is associated to higher incidence of polyspermic oocytes. However, disruption during cortical reaction as the cause for higher incidence of polyspermy could not be confirmed.

Keywords

kortikální granula, oocyt, folikulogeneze

Keywords

oocyte, folliculogenesis, cortical granule

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 12. 9. 2016

Thesis defence

• Supervisor: prof. Ing. Ladislav Máchal, DrSc.
• Reader: Leoš Pavlata, doc. MVDr., Ph.D., Miloslava Lopatářová, prof. MVDr., Josef Zajíc, externi

Mendel University in Brno

Faculty of AgriSciences

Doctoral programme / field:
Animal Breeding / Applied Animal Breeding