Stanovení aktivity membránově vázané glutathion-S-transferasy

Mgr. Andrea Celá

Bachelor's thesis

Determination of membrane-bound glutathione-S-transferase activity

Abstract:

Glutathion-S-transferasy (GSTs) jsou skupinou multifunkčních enzymů, které katalyzují nukleofilní atak thiolové skupiny glutathionu na elektrofilní centra různých endogenních i exogenních sloučenin. Vzniklé konjugáty jsou zpravidla méně toxické než původní sloučeniny. Tímto procesem GSTs přispívají k detoxifikaci. Enzymovou reakcí glutathionu se specifickým substrátem 1-chlor-2,4-dinitrobenzenem vzniká konjugát glutathion-2,4-dinitrobenzen. Jeho absorpční maximum je při vlnové délce 340 nm, čehož bylo využito při stanovení aktivity GST spektofotometricky a pomocí CE. Součástí bakalářské práce je také optimalizace CE metody pro stanovení aktivity GST. Byly sestrojeny kalibrační závislosti koncentrace konjugátu na absorbanci, respektive výšce píku s korelačním koeficientem vyšším než 0,996. Nejnižší aktivita ze studovaných typů enzymu byla stanovena u mikrosomální GST a byla nejméně ovlivněna působením kyseliny ethakrynové. Naopak inhibiční efekt kyseliny ethakrynové na rekombinantní enzym a GST v cytosolu byl přibližně dvakrát větší.

Abstract:

The glutathione-S-transfereses (GSTs) are a group of multifunctional enzymes which catalyse a nucleophilic attack of the thiole group of glutathione on electrophillic centres of various endogenous and exogenous compounds. Conjugates are generally less toxic than the parent compound. This process leads to the detoxification. Enzymatic reaction of glutathione with 1-chloro-2,4-dinitrobenzene provides conjugate glutathione-2,4-dinitrobenzene. Its absorption maximum is at wavelength 340 nm. The GST activity was determined spectrofotometrically as well as by using CE. This bachelor thesis describes an optimalization of CE method for determination of GST activity, too. Linear relationship for concentration the absorbance and the peak response with correlation coefficient above 0,996 were observed. The lowest activity and inhibition of GST was determined for microsomes. Whereas the inhibition of recombinant GST and GST in cytosol preparation was nearly twice as much.

Keywords

glutathion-S-transferasa, glutathion, 1-chlor-2, 4-dinitrobenzen, kyselina ethakrynová, kapilární elektroforéza, UV-VIS spektrofotometrie glutathione-S-transferase, glutathione, 1-chloro-2, 4-dinitrobenzene, ethacrynic acid, capillary electrophoresis, UV-VIS spectrophotometry

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 12. 5. 2011

Thesis defence

• Date of defence: 14. 6. 2011
• Supervisor: Mgr. Marta Pelcová, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Biochemistry / Biochemistry