Úloha oxidu uhelnatého během stárnutí oocytu prasete

Bc. Nikola Strachová

Diplomová práce

Role of carbon monoxide during porcine oocyte aging

Anotace:

Cílem diplomové práce bylo ověření hypotézy, podle které je oxid uhelnatý zapojen do regulace procesu stárnutí oocytu prasete.Pro ověření hypotézy byla sledována exprese dvou izoforem hemoxygenázy v oocytu prasete metodou Western blot a dále pak změny v buněčné lokalizaci izoforem hemoxygenázy během stárnutí prasečích oocytů pomocí imunohistochemické analýzy. U stárnoucích oocytů byl rovněž sledován účinek donorů oxidu uhelnatého a inhibitorů enzymů produkujících oxid uhelnatý.Western blot prokázal v oocytech prasete přítomnost dvou izoforem enzymu produkujícího oxid uhelnatý, hemoxygenázy 1 (HO-1) a hemoxygenázy-2 (HO-2).Imunohistochemická analýza potvrdila, že během procesu stárnutí oocytu prasete dochází ke změnám v buněčné lokalizaci hemoxygenázy, enzym HO-1 se přemisťuje z jaderné oblasti do cytoplazmy. Enzym HO-2 byl během stárnutí lokalizován pouze v cytoplazmě a k jeho relokalizaci nedošlo. Provedené experimenty ukázaly, že oxid uhelnatý ovlivňuje životaschopnost stárnoucích oocytů prasete. Inhibice hemoxygenáz pomocí inhibitoru Zn-PP IX způsobila zvýšení poměru apoptotických oocytů. Pokud byly oocyty během procesu stárnutí vystaveny oxidu uhelnatému uvolňujícího se z donoru oxidu uhelnatého, CORM-2, došlo ke snížení procenta apoptotických oocytů, což prokázalo antiapoptotický vliv oxidu uhelnatého na stárnoucí oocyty.

Abstract:

The aim of the master's thesis was to verify the hypothesis according to carbon monoxide is involved in the regulation of porcine oocyte aging process.To verify this hypothesis, expression of two heme oxygenase isoforms was monitored in porcine oocyte using the Western blot method, and also the changes in cell localization of both heme oxygenase isoforms were observed during the aging process of porcine oocytes using the immunohistochemical analysis. Also, the effect of carbon monoxide donors and inhibitors of carbon monoxide producing enzymes was observed in aging porcine oocytes.Western blot method showed a presence of both isoforms of carbon monoxide producing enzymes in porcine oocytes: heme oxygenase 1 (HO-1) and heme oxygenase 2 (HO-2).Immunohistochemical analysis confirmed changes in heme oxygenase cell localization and relocalization of the HO-1 enzyme from nuclear area to cytoplasm during the porcine oocyte aging process. In the course of porcine oocyte aging process, the HO-2 enzyme was found exclusively in cytoplasm and its relocalization was not observed. This thesis confirmed the carbon monoxide’s ability to affect the viability of aging of porcine oocytes. Heme oxygenase inhibition per the Zn-PP IX inhibitor increased the ratio of apoptotic oocytes. As long as the oocytes were exposed to carbon monoxide released from the CORM-2 carbon monoxide donor during their aging process, the ratio of apoptotic oocytes decreased, which proved the anti-apoptotic effect of carbon monoxide on porcine oocytes aging.

Klíčová slova

prase, oocyt, stárnutí, apoptóza, hemoxygenáza, oxid uhelnatý

Keywords

pig, oocyte, aging, apoptosis, heme oxygenase, carbon monoxide

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 12. 4. 2018

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: doc. Ing. Eva Chmelíková, Ph.D.

Česká zemědělská univerzita v Praze

Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů

Magisterský studijní program / obor:
Biotechnologie / Reprodukční biotechnologie