Cirkadiánní změny hemocytů Spodoptera littoralis

Terezie TREFILOVÁ

Bachelor's thesis

Circadian changes of Spodoptera littoralis haemocytes

Abstract:

ABSTRAKT: Naše práce studovala morfologii hemocytů a stabilitu základních nepatologických hematologických hodnot v průběhu 24 hodin, jako biomodel byla použita Spodoptera littoralis. (Boisd.) (Lepidoptera: Noctuidae) v šestém instaru. K pozorování hemocytů jsme vybrali světelnou mikroskopii. Před vlastním pozorováním jsme z odebrané hemolymfy zhotovili preparát, který jsme obarvili pomocí Pappenheimova barvení. Tato metoda barvení se běžně používá ve veterinární i v humánní laboratorní praxi v hematologii. Pozorovali jsme 6 druhů hemocytů a to: malé granulocyty (mGR), velké granulocyty (vGR), malé prohemocyty (mPR), velké prohemocyty (vPR), sférulocyty (SF) a plazmatocyty (PL). Pappenheimovo barvení nám též umožnilo pozorovat apoptózu. Znalost cirkadiánních změn hemocytů u S. littoralis, je velice důležitý fakt, pakliže bychom chtěli využívat tohoto živočicha jako nový biomodel například pro výzkum v oblasti imunologie, hematotoxikologie nebo farmakotoxikologie. Změny v hladinách některých látek mohou být fyziologické a to, i když jsou mimo hranici referenčních hodnot (Knapp et al., 1984). Zjistili jsme, že počet jednotlivých hemocytů v průběhu dne není stálý. O půlnoci pozorujeme nejnižší počet mPR i vPR a naopak nejvyšší počet apoptotických buněk a vGR. Pro zpřesnění a zrychlení odečtu koncentrace, jsme zkusili využít přístroje ELISA reader (Sunrise, Tecan) založený na fotometrickém měření. Vzhledem k velkým rozsahům naměřené koncentace (cca. od 2-30 mmol/l) posuzujeme využití ELISA readeru jako nevhodné.

Abstract:

Abstrakt This work is a study of the morphology of hemocytes and stability of the basic non-pathological hematological levels during 24 hours. Spodoptera littoralis. (Boisd.) (Lepidoptera: Noctuidae) in the sixth instar was used as the biological model. Light microscopy was the technique used to observe the hemocytes. Prior to the microscopy, preparations were made from the hemolymph and stained by Pappenheim's staining method. This is a method which is routinely used in veterinary as well as human laboratory practice in hematology. Six types of hemocytes were observed: small granulocytes (sGR), large granulocytes (lGR), small prohemocytes (sPR), large prohemocytes (lPR), spherulocytes (SP), and plasmatocytes (PL). Pappenheim's staining also enabled apoptosis to be followed. The knowledge of circadian changes in hemocytes in S. littoralis is very important if this animal is to be employed as a new biological model, for instance, for investigations in imunology, hematotoxicology or pharmacotoxicology. Changes in the levels of some substances can be physiological even if lying beyond the reference level limits (Knapp et al., 1984). We found the various hemocyte counts varying throughout the day. At midnight, the sPR and lPR counts are lowest while the apoptotic cell and lGR counts are highest. We tested the use of an ELISA reader (Sunrise, Tecan) (which is based on the photometric principle) with a view to increasing the precision and shortening the time of analysis. However, due to the large spans of concentrations, viz. roughly from 2 mmol/l to 30 mmol/l, the use of the ELISA reader was found unsuitable.

Keywords

Apoptóza, Diferenciální rozpočet hemocytů (DHC), Hemocyty, Koncentrace hemocytů, Pappenheimovo barvení, Spodoptera littoralis (Boisd.)

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 17. 8. 2009

Accessible from:: 17. 8. 2009

Identifier: 12956

Thesis defence

• Supervisor: prof. RNDr. Josef Berger, CSc.

University of South Bohemia in České Budějovice

Faculty of Health and Social Studies

Bachelor programme / field:
Specialization in Health Service / Health Technician