Vývoj a validace metody pro stanovení lansoprazolu a jeho metabolitů v biologických vzorcích.

Bc. Sabína Sedlačková

Master's thesis

Development and validation of the method for determination lansoprazol and their metabolites in biological smaples.

Abstract:

Lansoprazole is a proton pump inhibitor that suppresses gastric acid production. Considering with it, that lansoprazole is metabolised predominantly and selectively in two ways via cytochrome P450-CYP2C19 and CYP3A4, it can be potentially used to determine the metabolic activity of these CYP forms. This diploma thesis was designed to develop or adapt a method for the determination of lansoprazole and its metabolites 5-OH lansoprazole and lansoprazole-sulfone in human serum using a RP-HPLC system for routine uses in the LF MU Laboratory. At the same time, a suitable method for extracting substances from the biological matrix has been developed. Development was performed on a HPLC system (Shimadzu, Kyoto, JPN). The best results of separation and sensitivity were achieved by use an Ascentis Express C18 column (10 cm x 3.0 mm x 2.7 μm) and MF 20 mM acetic acid titrated to pH 4.5. The method was validated in basic parameters (repeatability, extraction recovery, detection limit and quantification). The applicability of the method was validated on real patient samples of human serum , whose are using 20 mg of lansoprazole.

Abstract:

Lansoprazol je inhibítorom protónovej pumpy, ktorý potlačuje produkciu žalúdočnej kyseliny. Vzhľadom k tomu, že sa lansoprazol metabolizuje dominantne a selektívne dvoma cestami prostredníctvom cytochrómu P450 - CYP2C19 a CYP3A4, je možné ho potencionálne použiť na stanovenie metabolickej aktivity týchto foriem CYP. Táto diplomová práca mala za účel vyvinúť alebo adaptovať metódu pre stanovenie lansoprazolu a jeho metabolitov 5-OH lansoprazolu a lansoprazol-sulfónu v ľudskom sére za použitia systému RP-HPLC pre rutinné využitie v laboratóriu LF MU. Súčasne bola vyvinutá vhodná metóda pre extrakciu látok z biologickej matrice. Vývoj prebiehal na systéme HPLC (Shimadzu, Kyoto, JPN). Najlepšie výsledky účinnosti separácie a citlivosti boli dosiahnuté pri použití kolóny Ascentis Express C18 (10 cm x 3,0 mm x 2,7 µm) a MF 20 mM kyseliny octovej titrovanej na pH 4,5. Metóda bola validovaná v základných parametroch (opakovateľnosť, výťažnosť extrakcie, limit detekcie a kvantifikácie). Použiteľnosť metódy bola overená na reálnych pacientskych vzorkách ľudského séra, ktorý užívajú 20 mg lansoprazolu.

Kľúčové slová

lansoprazol, 5-hydroxylansoprazol, lansoprazol-sulfon, RP-HPLC, CYP, CYP2C19, CYP3A4, UV, LOD, LOQ

Jazyk práce: Slovak

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 15. 5. 2017

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 15. 2. 2018
• Vedúci: doc. PharmDr. Jan Juřica, Ph.D.
• Oponent: mgr. Pavel Šištík

Masaryk University

Faculty of Science

Master programme / odbor:
Biochemistry / Bioanalyst - Specialist in Laboratory Methods