Stanovení znaků H2AX a Ki67 u extrakorporální fotoferézy

Lenka KNOTOVÁ

Bachelor's thesis

Detection of markers H2AX and Ki67 at extracorporeal photopheresis

Abstract:

Extrakorporální fotoferéza je metoda známá již od 80. let 20 století. Tato bakalářská práce se zabývá jejím znovuobjevením a využitím při kontrole kvality transfuzních přípravků, pomocí stanovení histonu H2AX, antigenu Ki67 a kaspázy 3. Cílem práce bylo ověřit, zda ECP poskytuje stejné výsledky jako ozáření vzorků gama zářením a nalézt vhodný protokol, který by umožnil sledování kvality vzniklého transfuzního přípravku. U vzorků při-pravených ozářením UVA nebo gama zářením bylo pomocí průtokové cytometrie sledováno zastoupení H2AX, Ki67 a kaspázy 3. Bylo ověřeno, že vzorky ozářené UVA zářením pomocí extrakorporální fotoferézy poskytují shodné výsledky jako vzorky ozářené gama zářením. Vlivem záření docházelo k velmi výrazným zlomům, které byly sledovány expresí histonu H2AX. Po ozáření nedochází k proliferaci buněk ve vzorku. Proliferace byla sledována po stimulaci vzorků mitogenem (PHA) a expresí Ki67. Po ozáření buňky vstupují do apoptózy, což bylo ověřeno detekcí kaspázy 3. Během psaní této bakalářské práce byl navržen vhodný protokol, který umožňuje sledování kvality vzniklého transfuzního přípravku.

Abstract:

Extracorporeal photopheresis has been a method known since the 1980s. This bachelor thesis deals with its rediscovery and use in the control of the quality of transfusion products, by the determination of histone H2AX, the Ki67 antigen and caspase 3. The aim of this work was to verify whether the ECP provides the same results as irradiation of gamma radiation samples and to find a suitable protocol to monitor the quality of the transfusion product. For samples prepared by UVA or gamma irradiation, the presence of H2AX, Ki67 and caspase 3 was monitored by flow cytometry. Due to radiation, there were very significant breaks, which were monitored by histone H2AX expression. After irradiation, cells did not proliferate in the sample. Proliferation was monitored after stimulation with mitogen samples (PHA) and Ki67 expression. After irradiation the cells enter apoptosis, which was verified by the detection of caspase 3. During the writing of this bachelor thesis a suitable protocol was designed which allows the quality of the transfusion product to be monitored.

Keywords

GvHD, ECP, gama záření, H2AX, Ki67, kaspáza 3

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 29. 3. 2019

Accessible from:: 31. 12. 2999

Thesis defence

• Supervisor: Ing. Tomáš Vlas

University of West Bohemia

Faculty of Health Care Studies

Bachelor programme / field:
Specialization in Health Care / Medical laboratory technicial