Histopatologické metody při studiu vývoje samičích pohlavních orgánů

Kristýna DĚDOVÁ

Bachelor's thesis

Histopathological methods used in the study of development of female internal sex organs

Abstract:

Předložená práce je založená na srovnávání a využitelnosti histologických metod pro studium struktury těla, především vnitřního samičího pohlavního ústrojí. Studie byla prováděna u komárů Culex pipiens quinquefasciatus Say. Studovaná tkáň byla fixována ve fixačním činidle Bouin, modifikovaný Dubosque- Brasil, po dobu minimálně 6-8 hodin nebo v Carnoyho fixáži po dobu 5 a 10 minut. Bouin se ukázal jako vhodnější fixační tekutina, protože se v něm dá uchovávat sledovaná tkáň po neomezeně dlouhou dobu bez toho, že by tkáň byla přefixovaná. K tomuto jevu může naopak dojít při používání Carnoyho fixáže. U fixáže Carnoy je zapotřebí stanovit dobu prosycování tkáně, protože používané fixační činidlo proniká u jednotlivých tkání různou dobu a hrozí znehodnocení materiálu jeho přefixováním, což má za následek drobení tkání a materiál je nepoužitelný pro histologické studie. Nafixovaná tkáň byla po odvodnění zalita do paraplastu. Z materiálu nafixovaného alkoholovým Bouinem, modifikace Dusque-Brasil, byly také připraveny bločky zalité do pryskyřice pro přípravu polotenkých řezů. Histologické řezy z paraplastových bločků byly zhotovovány na automatickém mikrotomu Leica a polotenké řezy z pryskyřičných bločků na ultramikrotomu Reichert. Řezové preparáty byly barveny hematoxyliny Meyer či Harris nebo směsí barviv podle Malloryho barvící metody. Pro přehledné biologické preparáty je nejvhodnější Malloryho barvící metoda, lépe rozlišuje struktury studované tkáně. Polotenké řezy je možné barvit pouze toluidinovou modří, která je současně i histochemickou reakcí prokazující přítomnost sacharidů. Tato metoda je vhodná pro sledování jednotlivých jemných struktur. Její nevýhodou je složitost při přípravě sériových řezů nutných při studiu jednotlivých fází vývoje pohlavních orgánů hmyzu. Polotenké řezy však mají i velkou výhodu, a to při zpracovávání materiálů obsahujícího chitinové struktury {--} nedochází k jejich vylamování a potrhání studovaných tkání jako je tomu u parafinových řezů.

Abstract:

Presented thesis is based on comparison and usability of histological methods for the study of body structure, especially inner female genital organs. The study was carried out in mosquitoes Culex pipiens quinquefasciatus Say. Studied tissue was fixed in a fixation agent Bouin, modified Dubosque-Brasil, for the period of minimum 6-8 hours or in Carnoy fixation for the priod of 5 and 10 minutes. Bouin proved as a more convenient fixation liquid because the tissue can be stored in it for non-limited period of time with no over fixation of the tissue. This can happen in case of the use of Carnoy fixation. In Carnoy fixation it is necessary to determine the period of tissue soaking because the used fixation agent penetrates particular tissues for a different period of time and degradation of material by over fixation threatens, which results in disintegration of tissues and the material is non-usable for histological studies. Fixed tissue was after that cast in paraplast. From the material fixed by alcoholic Bouin, modification Dusque-Brasil, the blocks cast in resin were made for the preparation of half-thin sections. Histological sections from paraplast blocks were made at automatic microtone Leica and half-thin sections from resin blocks at ultra microtone Reichert. Section preparations were coloured either by Meyer and Harris haematoxylins or by the mixture of colours according to Mallory colouring method. For general biological preparations Mallory colouring method is the most convenient; it distinguishes the structures of studied tissue better. Half-thin sections can be coloured by toluidine blue, which is simultaneously a histochemical reaction, proving the presence of carbohydrates. This method is convenient for watching particular fine structures. Its disadvantage is the complexity at the preparation of serial sections necessary for the study of particular phases of insect genital organs development. Half-thin sections have also a significant advantage, namely at processing of materials containing chitin structures-nor chipping nor laceration of studied tissue occurs, as it is in paraffin sections.

Keywords

histologie, barvící metody, Culex pipiens quinquefasciatus, samičí pohlavní orgány

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 14. 5. 2008

Accessible from:: 14. 5. 2008

Identifier: 9958

Thesis defence

• Date of defence: 24. 6. 2008
• Supervisor: doc. RNDr. Ivan Gelbič, CSc.

University of South Bohemia in České Budějovice

Faculty of Health and Social Studies

Bachelor programme / field:
Specialization in Health Service / Health Technician